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《河北农业大学》 2018年
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PRLR等基因在不同羽型坝上长尾鸡皮肤组织中的表达变化研究

张乐超  
【摘要】:快慢羽性状被用于雏鸡性别鉴定,并且快羽鸡与慢羽鸡存在生产性能的差异。为了研究不同羽型坝上长尾鸡PRLR、SPEF2等基因在羽毛发育差异中的作用,本研究采集胚胎19和20天以及出雏0日龄的快羽和慢羽坝上长尾鸡的主翼羽和覆主翼羽的羽毛,检测其长度;采集胚胎12、15、19日龄和出雏后0、15、20、35、56日龄的快羽坝上长尾鸡和慢羽坝上长尾鸡毛囊组织,提取DNA和RNA,利用RFLP对坝上长尾鸡的羽速类型进行检测,半定量RT-PCR检测PRLR两种剪接体的表达量,利用Protparam、PSORT II、SignalP4.1、TMHMM、SOPMA和SWISS-MODEL软件预测PRLR基因的两种剪接体编码蛋白的氨基酸理化性质和结构,并对PRLR基因启动子活性区域进行了探究;利用RT-qPCR检测PRLR(aPRLR)、SPEF2、FUSION、FST和BMP2基因的表达量,分析基因表达与羽毛发育间的关系。结果表明,坝上长尾鸡的羽速表型是由PRLR和SPEF2基因的重复造成,而与ev21未占位区重复序列无关。快羽主翼羽和覆主翼羽长度20胚龄均显著高于19胚龄(P0.05),而与出雏0日龄没有显著差异(P0.05);而慢羽主翼羽长度20胚龄与19胚龄没有显著差异(P0.05),而显著低于出雏0日龄(P0.05),慢羽覆主翼羽三个节点均存在显著差异(P0.05),随日龄显著增长。快慢羽的羽速分化表现在:19~20胚龄慢羽相对于快羽主翼羽生长速度降低,和20~21胚龄慢羽覆主翼羽仍然保持19~20胚龄较高生长速度,而快羽在该胚龄期覆主翼羽生速度降低。RT-PCR检测发现坝上长尾鸡毛囊组织中不存在含外显子8的PRLR剪接体类型,但存在2883(PRLR_(S1))和2400(PRLR_(S2))两种剪接体。半定量RT-PCR发现:D0慢羽鸡PRLR_(S1)表达显著低于快羽(P0.05),D15慢羽表达显著高于快羽(P0.05);E19慢羽鸡PRLR_(S2)表达显著高于快羽(P0.05),而D35慢羽表达显著低于快羽(P0.05)。快羽鸡PRLR_(S1)表达在E15、E19和D56显著高于PRLR_(S2)(P0.05),慢羽鸡除在D0的PRLR_(S1)表达显著低于PRLR_(S2)(P0.05)和出雏后D15二者表达没有显著差异外(P0.05),孵化全期和其他出雏后期PRLR_(S1)表达均显著高于PRLR_(S2)(P0.05)。由两种剪接体表达得出:(1)慢羽PRLR_(S2)在E19-D0高表达可能与E19~20慢羽主翼羽生长速度降低有关,PRLR_(S2)发挥抑制慢羽主翼羽生长作用;(2)PRLR_(S1) D0期在快羽鸡高表达,可能与20~21胚龄快羽覆主翼羽生速度降低有关,PRLR_(S1)发挥抑制快羽覆主翼羽生长作用。(3)快慢羽鸡多个时点PRLR_(S1)高表达于PRLR_(S2),再次说明PRLR_(S1)发挥抑制覆主翼羽生长的作用,D0慢羽鸡PRLR_(S2)的高表达起到抑制慢羽主翼羽生长作用。预测发现PRLR_(S1)蛋白分子式为C_(4166)H_(6472)N_(1106)O_(1298)S_(40),相对分子质量为94102.25,包含831个氨基酸残基;PRLR_(S2)蛋白分子式为C_(3461)H_(5382)N_(926)O_(1076)S_(34),相对分子质量为78270.41,包含688个氨基酸残基,均为不稳定的酸性亲水蛋白质。二者共有区域存在5个差异氨基酸位点,PRLR_(S1)为S、M、L、P、S,而PRLR_(S2)依次为N、I、F、S、N。PRLR_(S1)在第24位氨基酸有一个信号肽,而PRLR_(S2)则没有。PRLR_(S1)主要存在于胞外、高尔基体、内质网和细胞膜;而PRLR_(S2)主要存在于细胞核,PRLR_(S1)和PRLR_(S2)均有跨膜区。对这两个蛋白二级结构分析认为二者均属于常规蛋白。克隆PRLR基因上游-37 bp~-1738 bp和-10252 bp~-8957 bp启动子区P2和P4,构建荧光素酶报告基因的重组质粒载体,以DF-1细胞进行双荧光素酶报告基因的瞬时转染,结果发现这两段的活性比值与阴性对照均没有显著差异(P0.05),说明两段序列不具有启动子活性。RT-qPCR检测分析发现,FST表达:E15日龄慢羽表达高于快羽(P0.05),麻鸡表达高于黑鸡(P0.05);E19慢羽表达低于快羽(P0.05),主要表现为慢羽麻鸡的低表达;D35日龄慢羽表达低于快羽(P0.05),主要表现为快羽麻鸡的高表达。FST对羽型发育变化的影响需要继续探讨。SPEF2表达:麻色鸡表达在E15显著高于黑色鸡(P0.05),表现为快羽麻鸡的高表达。E19-D0的SPEF2基因表达在快慢羽中都有上升,但未达到显著水平(P0.05),并且快慢羽之间差异不显著(P0.05)。说明SPEF2是否对羽毛生长有影响有待进一步的研究。BMP2表达:E19和D0麻鸡表达显著高于黑色鸡(P0.05),慢羽表达量显著高于快羽(P0.05),表现为慢羽麻鸡的显著高表达。不能认为BMP2与羽型发育存在相关关系。aPRLR表达:E15和E19显著高表达于其他时点(P0.05),且慢羽E19表达显著高于快羽(P0.05),两种羽色的表达没有差异(P0.05),说明PRLR高表达与胚胎后期的羽毛发育有关。FUSION表达:与aPRLR表达特征一致,E15和E19显著高表达于其他时点(P0.05),且FUSION仅在慢羽中表达,两种羽色的表达没有差异(P0.05),说明FUSION高表达与胚胎后期的慢羽鸡羽毛发育有关。克隆测序发现PRLR有7个突变碱基,包括2个同义突变和5个错义突变,同义突变在PRLR_(S1)序列的位置为第309 bp和1068 bp,错义突变的位置为第106、476、1492、1726和1883 bp,其中106和476位置氨基酸突变位于胞外域的配体结合区,可能影响PRLR与PRL结合;其它3个位于胞内域,而1883位置的突变导致出现了一个N-糖基化位点。综上,快羽和慢羽坝上长尾鸡主翼羽的生长分化出现在E19-E20天,覆主翼羽出现在E20-D0。坝上长尾鸡毛囊中PRLR基因存在PRLR_(S1)和PRLR_(S2)两种剪接体类型;PRLR_(S1)在快羽D0的高表达可能与快羽覆主翼羽在E20到D0生长速度降低有关;PRLR_(S2)在慢羽E19高表达可能与慢羽主翼羽在E19到E20生长速度降低有关。aPRLR基因在胚胎期慢羽的表达高于快羽;FUSION基因仅在慢羽鸡表达,并且在E15和E19显著高表达,可能与慢羽表型的形成有关;FST、SPEF2和BMP2基因的表达与羽型的关系需要继续探讨。PRLR基因上游-37 bp~-1738 bp和-10252 bp~-8957 bp区域不具有启动子活性。PRLR基因mRNA存在7个SNPs,包括5个错义突变和2个同义突变。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S831.2

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵彩娟;刘小辉;李祥龙;王茂森;;羽色和羽型对坝上长尾鸡羽毛生长脱换的影响[J];黑龙江畜牧兽医;2016年05期
2 刘小辉;赵彩娟;赵书雨;李祥龙;逯春香;李杰;;快慢羽基因对坝上长尾鸡育成期体重与羽毛生长的影响[J];湖北畜牧兽医;2015年01期
3 Nishi Karunasinghe;Karen Bishop;Pamela Murray;Yuanye Xu;Megan Goudie;Lance Ng;Shuotun Zhu;Dug Yeo Han;Lynnette R Ferguson;Jonathan Masters;Benji Benjamin;Michael Holmes;;Role of β-microseminoprotein from prostate cancer initiationto recurrence: A mini-review[J];World Journal of Clinical Urology;2014年01期
4 李竞一;李荣妮;王晓亮;王翔宇;杨永林;鲍海港;赵春江;凌遥;;慢羽鸡ev21结合位点缺失个体的检测[J];中国畜牧杂志;2011年11期
5 白春艳;陈强;杨长锁;潘玉春;;鸡羽速基因与內源禽白血病病毒的关系及其在育种中的应用[J];中国家禽;2011年08期
6 褚晓红;胡锦平;卢立志;王亚琴;陈维虎;徐宁迎;;浙东白鹅催乳素受体基因的克隆及其表达特点的研究[J];畜牧兽医学报;2008年06期
7 苏蕊;李金泉;张文广;尹俊;赵珺;常子丽;;骨形态发生蛋白2(BMP2)基因在内蒙古绒山羊不同时期皮肤毛囊中的表达[J];中国农业科学;2008年02期
8 郭炫;孙永峰;隋玉健;吴伟;;鸡胚胎期毛囊形态发生的研究进展[J];中国家禽;2007年18期
9 邹晓庭;黄爱霞;刘进国;;Olanzapine对美国王鸽催乳素受体(PRLR)基因表达的影响[J];农业生物技术学报;2007年04期
10 傅泽红;邢光东;刘铁铮;孔鸽萍;;鹅催乳素受体基因cDNA5′端序列克隆[J];江苏农业学报;2007年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 赵计昌;鸡快慢羽候选基因的筛选[D];扬州大学;2016年
2 陈杰;皖江白鹅PRL、PRLR基因遗传特性及其与产蛋性能的相关性研究[D];安徽师范大学;2012年
3 朱盼;鹅生殖周期催乳素受体基因(PRLR)mRNA表达规律的研究[D];安徽农业大学;2009年
4 赵楠;北京鸭A-FABP、PRLR基因多态性及其与生产性状的关联分析[D];西北农林科技大学;2008年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 喻世刚;王钢;廖娟;曾昌巧;;羽速基因对沐川乌骨黑鸡肤色性状和体重的影响[J];黑龙江畜牧兽医;2018年10期
2 马如雪;张大山;张传生;李祥龙;;快慢羽坝上长尾鸡0~20周龄生长发育规律研究[J];黑龙江畜牧兽医;2018年09期
3 王莉;葛凯;陈兴勇;耿照玉;;不同比例青饲料对皖西白鹅羽毛品质与BMP2基因表达量的影响[J];安徽农业大学学报;2018年02期
4 张津闽;张小玉;林森;黄林;郑玉才;林亚秋;;藏系绵羊BMP2基因克隆及组织表达分析[J];基因组学与应用生物学;2018年04期
5 魏彦辉;周荣艳;锡建中;李相运;李祥龙;李兰会;陈辉;;绵羊卵巢PSP94基因的克隆及生物信息学分析[J];畜牧与兽医;2017年12期
6 张乐超;王晗;张秀玲;刘春杨;王麒;周荣艳;李祥龙;李兰会;;鸡ev21占位区和未占位区重复序列结构与羽速表型关系研究[J];畜牧兽医学报;2017年06期
7 金梅;康琳;孙东禹;朴君;朴敬爱;赵凤琴;;慢病毒介导小鼠K26/KAP26.1基因过表达对相关基因的调控作用[J];中国农业科学;2017年10期
8 王章;袁泳兰;包志江;李婷;董晶;安立龙;效梅;杜炳旺;张丽;;盔顶珍珠鸡快慢羽基因分型及早期性别鉴定[J];广东农业科学;2017年05期
9 魏彦辉;周荣艳;李祥龙;锡建中;李兰会;陈辉;张振红;;抗A亚群禽白血病受体基因在三个鸡群中分布的研究[J];黑龙江畜牧兽医;2017年05期
10 晏志勋;初芹;张剑;王海宏;耿爱莲;曾另超;刘华贵;;北京油鸡禽白血病净化效果初报[J];中国家禽;2016年17期
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 张乐超;PRLR等基因在不同羽型坝上长尾鸡皮肤组织中的表达变化研究[D];河北农业大学;2018年
2 胡彦竞科;四川白鹅GnRH、GnIH基因克隆、多态性及其与产蛋量的关联性研究[D];西南大学;2017年
3 金雪梅;松果体参与鹅就巢调控过程的分子网络构建[D];四川农业大学;2015年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈昆;;专家观点[J];建筑电气;2013年10期
2 叶敬礼;;影响肉鸡羽毛生长的因素及相应措施[J];畜禽业;2013年10期
3 韩海霞;曹顶国;雷秋霞;李福伟;李桂明;周艳;逯岩;;羽速基因对莱芜黑鸡早期生长速度和蛋用性能的影响[J];中国畜牧兽医;2009年07期
4 吴宝玉;;坝上长尾鸡的保护与开发利用[J];中国牧业通讯;2007年03期
5 司兴奎;陈建红;张济培;顾万军;;家禽羽毛异常的原因及防制措施[J];中国家禽;2006年22期
6 宁中华,王忠,彭丹芳,侯卓成,徐桂云;禽白血病和羽速基因对白壳蛋鸡生产性能的影响[J];中国畜牧杂志;2005年10期
7 董乐津,万会芝,魏景业;从羽毛变换纵观鸡的生产性能[J];养禽与禽病防治;2003年10期
8 宋素芳,康相涛,竹学军;羽速基因在养鸡业中的应用[J];中国家禽;2003年18期
9 宋素芳,康相涛,孙桂荣 ,王彦斌,李国喜,李明;羽速基因对固始鸡主要生产性能的影响[J];中国农学通报;2003年04期
10 董乐津,万会芝,魏景业;关注羽毛变换 提高生产性能[J];中国家禽;2003年14期
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 李传锋;三个猪种ESR、PRLR及FSH-β基因多态性及与繁殖性状关联分析[D];黑龙江八一农垦大学;2015年
2 宋永利;牛PR及PRLR基因多态性及其与精液品质的相关性分析[D];吉林大学;2009年
3 佘德勇;北京鸭和樱桃谷鸭生长性能、肌肉理化特性比较及填饲对其影响[D];中国农业大学;2005年
4 方弟安;皖西白鹅就巢的内分泌机制及其调控的研究[D];安徽农业大学;2005年
【相似文献】
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1 李伟;;血单个核细胞上PRLR mRNA的表达在桥本氏甲状腺炎患者中的诊断研究[J];健康之路;2017年03期
2 穆晓琨;字向东;王永;黄磊;徐华伟;马力;付锡三;朱万岭;林世武;;乐至黑山羊PRLR基因外显子10多态性与产羔数的关系研究[J];生物技术通报;2011年03期
3 ;Study on Relationship Between Polymorphisms in FSHβ,ESR,PRLR Genes of A Novel Huai Pig Line II and Its Litter Size[J];Animal Husbandry and Feed Science;2009年Z2期
4 段修军;董飚;杨廷桂;孙国波;王健;张玲;李小芬;;鹅PRLR基因克隆及在生殖相关组织中的表达规律[J];西南农业学报;2015年06期
5 赵艳红;王志英;石玲;郑竹清;王琳;李金泉;;PRLR基因在内蒙古绒山羊下丘脑、垂体及卵巢中的表达[J];东北农业大学学报;2012年03期
6 ;Analysis of PRLR and BF Genotypes Associated with Litter Size in Beijing Black Pig Population[J];Agricultural Sciences in China;2008年11期
7 赵楠;刘小林;侯水生;王杰;黄苇;;北京鸭PRLR基因的PCR-SSCP检测[J];西北农业学报;2008年03期
8 王杰;侯水生;刘小林;黄苇;杨晓刚;;北京鸭PRLR基因部分序列的克隆及分析[J];中国家禽;2007年11期
9 郭海燕;金银;李拥军;程国虎;张昊;;PRLR基因多态性与湖羊产羔性能的关系[J];扬州大学学报(农业与生命科学版);2017年01期
10 薛慧良;王东宽;徐金会;徐来祥;;催乳素受体与黑线仓鼠胎产仔数的关联性[J];生态学杂志;2013年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黄贺;狄生伟;田亚光;李和平;王希彪;;民猪生殖器官PRLR基因表达发育变化的研究[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
2 吴宪红;龙石太;王永;字向东;;催乳素受体基因(PRLR)在乐至黑山羊和藏山羊不同组织中的差异表达[A];中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编(2009-2013)[C];2013年
3 王强;郭海燕;尹修远;李拥军;;PRLR基因多态性与湖羊产羔性能的关系[A];2017年全国养羊生产与学术研讨会暨养羊学分会第七次全国会员代表大会论文集[C];2017年
4 赵强;马友记;;绵羊PRLR基因的克隆及在下丘脑-垂体-性腺轴中差异表达的研究[A];2015年全国养羊生产与学术研讨会论文集[C];2015年
5 张巧灵;姜俊兵;贺俊平;赫晓燕;耿建军;董常生;;催乳素受体基因(PRLR)与羊驼繁殖性能关系的初探[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2006年
6 王继英;武英;张大龙;王怀中;郭建凤;呼红梅;张印;王诚;;莱芜黑猪高繁基因多态性及其对产仔数的影响[A];山东畜牧兽医学会养猪专业委员会第一届学术研讨会论文集[C];2007年
7 吴洪宾;王遵宝;余鹏;赵宗胜;;PRLR基因外显子10多态性及其与绵羊产羔数关系的研究[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
8 王宵燕;李碧春;经荣斌;宋成义;;RBP_4和PRLR基因与苏姜猪产仔性状的相关性分析[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
9 褚晓红;胡锦平;卢立志;徐宁迎;;七个鹅种PRLR基因的单核苷酸多态性研究[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
10 王杰;侯水生;刘小林;黄苇;;北京鸭PRLR基因部分序列的克隆及分析[A];2009中国肉鸭产业发展高层论坛论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张芃子;泌乳素及其受体对非酒精性脂肪肝及肝脏脂代谢的影响及机制研究[D];南京大学;2018年
2 曹果清;猪PRLR基因和FSHβ亚基基因多态性研究[D];山西农业大学;2004年
3 邢光东;鹅催乳素受体基因克隆和多克隆抗体制备及组织表达分析[D];南京农业大学;2011年
4 李慧铭;miR-142-3p对小鼠乳腺发育和泌乳重要功能基因Prlr的表达调控[D];东北农业大学;2013年
5 张芸娜;从PRL/PRLR-JAK2/STAT5信号传导通路角度探讨疏肝补肾法治疗高催乳素血症月经后期的实验及临床研究[D];北京中医药大学;2015年
6 南雪梅;奶山羊乳腺物质代谢研究[D];东北农业大学;2010年
7 侯金星;奶山羊产奶性状候选基因的筛选及其多基因聚合效应的研究[D];西北农林科技大学;2013年
8 张敏;蛋鸽就巢内分泌机制及其营养调控研究[D];浙江大学;2011年
9 潘和平;五个不同地区牦牛部分生产性能候选基因多态性的研究[D];甘肃农业大学;2008年
10 姚新奎;伊犁马、新吉马及其杂交马乳理化指标、泌乳特性初步研究[D];新疆农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张乐超;PRLR等基因在不同羽型坝上长尾鸡皮肤组织中的表达变化研究[D];河北农业大学;2018年
2 于农淇;三个家马品种泌乳相关基因多态性及其与伊犁马产奶量的关联研究[D];西北农林科技大学;2017年
3 潘梅;干扰PRLR基因表达抑制人乳腺癌细胞增殖作用的研究[D];南京医科大学;2007年
4 朱盼;鹅生殖周期催乳素受体基因(PRLR)mRNA表达规律的研究[D];安徽农业大学;2009年
5 王秀娟;[D];陕西师范大学;2016年
6 黄守婷;鸭PRLR基因单核苷酸多态性和拷贝数变异研究[D];福建农林大学;2015年
7 沈曼曼;肉鸽繁殖期生殖激素变化规律及PRLR表达和多态性分析[D];扬州大学;2012年
8 宋金委;基于PRLR-JAK-STAT5信号传导通路测定鹅催乳素的新方法研究[D];山东农业大学;2016年
9 王华鑫;[D];陕西师范大学;2015年
10 孔艳华;桥本甲状腺炎患者外周血单个核细胞上PRLR mRNA的表达[D];安徽医科大学;2012年
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