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《河北医科大学》 2015年
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感染期子宫颈癌U14细胞荷瘤小鼠抑制巨噬细胞CCL5分泌的机制研究

任虹  
【摘要】:目的:探讨感染期子宫颈癌U14细胞荷瘤小鼠抑制巨噬细胞分泌正常T细胞表达和分泌趋化因子5(RANTES/CCL5)的机制。方法:取6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠,随机分为4组,每组6只。无瘤组:皮下注射培养基;荷瘤组:皮下注射U14细胞;无瘤+脂多糖(LPS;用于诱导小鼠感染)组:皮下注射培养基,腹腔内注射LPS;荷瘤+LPS组:皮下注射U14细胞,腹腔内注射LPS。1采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法及荧光定量PCR(Q-PCR)技术检测各组小鼠血清及炎性细胞中CCL5和前列腺素2(PGE2)的表达。2提取感染期荷瘤小鼠血清制备肿瘤条件培养基(TCM),在体外诱导巨噬细胞,检测诱导感染前、后各组上清液和巨噬细胞中CCL5、PGE2和环磷酸腺苷(c AMP)的表达。3选用环氧化酶2(COX-2)抑制剂-NS-398阻断PGE2的产生,检测诱导感染前、后各组上清液和巨噬细胞中CCL5、PGE2和环c AMP的表达。4选用蛋白激酶A(PKA)阻滞剂-H89阻断c AMP/PKA信号通路,检测各组上清液和巨噬细胞中PGE2、CCL5和c AMP的表达。结果:1荷瘤组小鼠血清中CCL5蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 m RNA的表达水平(151.34±35.355 pg/ml;1)均明显低于无瘤组(690.81±84.852 pg/ml;4.53±0.848),差异均有统计学意义(P0.05)。其血清中PGE2蛋白含量及巨噬细胞中PGE2 m RNA的表达水平(1198.49±82.731 pg/ml;5.75±0.777)均明显高于无瘤组(186.84±25.455 pg/ml;1),差异均有统计学意义(P0.05)。无瘤+LPS组小鼠血清中CCL5蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 m RNA的表达水平(4049.34±141.421 pg/ml;31.49±1.980)均高于明显高于荷瘤+LPS组(1950.68±70.71 pg/ml;12.11±2.828),差异均有统计学意义(P0.05)。,血清中PGE2蛋白含量及巨噬细胞中PGE2m RNA的表达水平(676.5±70.003 pg/ml;3.35±0.353)均低于荷瘤+LPS组(2550±381.837 pg/ml;11.55±0.949),差异均有统计学意义(P0.05)。2各组小鼠血清制备的肿瘤条件培养基在体外培养巨噬细胞时,荷瘤组小鼠TCM对培养基中蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 m RNA的表达水平(1625.70±176.776 pg/ml;28.65±1.202)高于无瘤组TCM(27.43±2.828pg/ml;1),差异均有统计学意义(P0.05)。TCM中PGE2蛋白含量及巨噬细胞中PGE2 m RNA的表达水平(790.49±155.563 pg/ml;1.67±0.247)均明显高于无瘤组TCM(448.30±114.551 pg/ml;1),差异均有统计学意义(P0.05)。TCM中c AMP蛋白含量及巨噬细胞中c AMP m RNA的表达水平(164.48±29.698 pg/ml;1.59±0.268)均明显高于无瘤组TCM(117.54±24.748 pg/ml;1),差异均有统计学意义(P0.05)。无瘤+LPS组TCM对培养基中蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 m RNA的表达水平(10475.12±742.46 pg/ml;212.01±5.734)均高于明显高于荷瘤+LPS组TCM(6375.09±530.33 pg/ml;142.28±2.545),差异均有统计学意义(P0.05)。无瘤+LPS组TCM中PGE2蛋白含量及巨噬细胞中PGE2 m RNA的表达水平(2437.54±95.459 pg/ml;4.31±0.707)均低于荷瘤+LPS组(3440.56±162.634 pg/ml;5.94±0.283),差异均有统计学意义(P0.05)。无瘤+LPS组TCM中c AMP蛋白含量及巨噬细胞中c AMP m RNA的表达水平(339.53±13.435 pg/ml;4.055±0.353)均明显低于荷瘤+LPS组TCM(541.50±41.719 pg/ml;5.35±0.495),差异均有统计学意义(P0.05)。3在荷瘤+LPS组基础上使用COX-2抑制剂NS398后,培养基中CCL5蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 m RNA的表达水平升高7690.58±268.70 pg/ml;158.95±8.910),PGE2蛋白含量及巨噬细胞中PGE2 m RNA的表达水平降低(2819.96±152.027 pg/ml;4.94±0.283),而c AMP蛋白含量及巨噬细胞中c AMP m RNA的表达水平也有所降低(464.57±7.778pg/ml;4.26±0.424)。在荷瘤+LPS组+NS398基础上使用PKA抑制剂H89后,培养基中CCL5蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 m RNA的表达水平进一步升高(8375.09±520.33 pg/ml;177.05±8.838),PGE2蛋白含量及巨噬细胞中PGE2 m RNA的表达水平也有所降低(2650.34±35.355 pg/ml;4.66±0.424),而c AMP蛋白含量及巨噬细胞中c AMP m RNA的表达水平进一步降低(367.53±13.435 pg/ml;3.11±0.707)。结论:感染期子宫颈癌U14细胞荷瘤小鼠血清可在体外抑制巨噬细胞CCL5的产生,这种抑制效应通过c AMP/PKA通路受PGE2的调控。
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R737.33

【参考文献】
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