收藏本站
《河北医科大学》 2015年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

极长链脂肪酸与2型糖尿病大鼠脑Aβ生成的关系研究

孙雪培  
【摘要】:目的:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种慢性神经系统退行性疾病,以进行性记忆和认知功能减退为主要临床表现。AD的特征性病理改变为β-淀粉样蛋白(amyloid protein,Aβ)在神经细胞外沉积形成老年斑。Aβ是AD的主要致病因素。AD不仅是老年人常见的疾病,也是糖尿病(diabetes mellitus,DM)病人高发的疾病。这对糖尿病病人无疑是雪上添霜。因此,亟待弄清糖尿病病人高发AD的原因,找到干预措施。基于以下两个事实:(1)报道显示,AD病人脑中极长链脂肪酸(very long chain fatty acids,VLCFA,≥C22)水平增加。VLCFA对神经细胞具有脂毒性,可以导致细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)产生增多,氧化应激增强。而氧化应激是目前公认的Aβ生成增多的重要机制之一。(2)糖尿病是糖脂代谢紊乱疾病。我们假设,在糖尿病状态下,脂代谢的紊乱会使脑中的VLCFA聚集,进而引起氧化应激,使Aβ异常生成增加,最终导致认知障碍,糖尿病AD发生。为了证实此假设,本实验用高脂饮食加小剂量STZ的方法诱导2型糖尿病的大鼠模型,观察2型糖尿病大鼠的学习记忆情况,以及脑中Aβ的生成、氧化应激水平和VLCFA的变化,探讨VLCFA在2型糖尿病大鼠脑Aβ生成中的作用,为预防及治疗糖尿病AD提供新的实验依据。方法:1实验动物以本实验室侯连国等人制备的2型糖尿病大鼠的脑组织为实验材料。实验动物分为对照组(Con)和2型糖尿病组(DM)。2 Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力用上海吉量软件科技有限公司Morris水迷宫,采用定位航行试验和空间探索试验,分别记录大鼠的平均逃避潜伏期、穿越原平台位置的次数和第一次到达原平台的时间,以评估大鼠的学习记忆能力。3 ELISA检测脑组织Aβ40、BACE1的含量用日本IBL公司ELISA试剂盒进行测定,脑Aβ40的含量以pg/mg protein表示;脑BACE1的含量以ng/μg protein表示。4实时定量PCR检测脑APP和BACE1的m RNA表达用美国OMEGA公司总RNA提取试剂盒提取大鼠脑组织总RNA。以18S r RNA做内参,实时定量PCR测定APP、BACE1 m RNA的相对表达量。5免疫组织化学分析脑组织APP的蛋白水平对大鼠脑组织石蜡切片进行免疫组织化学染色,分析APP的蛋白表达水平。6气相色谱分析脑组织VLCFA提取各组大鼠脑组织脂肪酸,用日本岛津公司气相色谱仪(GC-2010 Plus)分析每种VLCFA的含量。7 TBA法测定脑组织丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法进行测定,脑MDA的含量以nmol/mg prot表示。8 Western blot检测NOX4,p47和HO-1的蛋白表达提取大鼠脑组织总蛋白,Western blot测定NOX4,p47和HO-1蛋白的相对表达量。9数据处理实验数据采用SPSS 17.0软件进行统计学分析,对测定结果进行正态性与方差齐性检验,数据用`x±SD表示。逃避潜伏期数据采用重复测量的方差分析(One-way repeated measures ANOVA)进行统计,其它数据采用Student’s t检验分析两组之间均数的统计学差异。以P0.05表示差异有统计学意义。结果:1 DM大鼠的学习记忆能力下降与Con组相比,虽然DM组大鼠第一天的逃避潜伏期有所延长,但随后几天均没有明显差异。DM组大鼠,与Con组相比,穿越原平台次数明显减少,第一次到达原平台时间明显延长,差异有统计学意义(P0.01)。表明,2型糖尿病大鼠的学习记忆能力下降。2 DM大鼠脑中Aβ生成增加2.1脑组织Aβ的含量ELISA结果显示,Con组和DM组大鼠脑组织Aβ40含量分别为:Con(4.87±0.71 pg/mg protein),DM(6.22±0.81 pg/mg protein)。DM组脑组织Aβ含量较Con组明显增加,差异有统计学意义(P0.01)。表明,糖尿病大鼠脑Aβ水平增加。2.2脑组织APP的表达实时定量PCR结果显示,DM组脑组织APP m RNA的表达水平(0.046±0.014)较Con组(0.025±0.007)明显升高,差异有统计学意义(P0.001)。免疫组化结果显示,DM组脑组织中APP阳性细胞数量、着色深度较Con组明显增加;图像分析显示,DM组大鼠脑中APP阳性细胞的平均光密度值较Con组显著升高,差异有统计学意义(P0.001)。表明,糖尿病大鼠脑APP的m RNA和蛋白表达均增加。2.3脑组织BACE1的表达实时定量PCR结果显示,DM组脑组织BACE1 m RNA的表达水平(0.912±0.038)较Con组(0.661±0.118)明显升高,差异有统计学意义(P0.001)。ELISA结果显示,DM组脑组织BACE1的含量(0.95±0.09 ng/μg protein)较Con组(0.78±0.06 ng/μg protein)明显增加,差异有统计学意义(P0.01)。表明,糖尿病大鼠脑BACE1的m RNA和蛋白表达均增加。以上结果表明,糖尿病大鼠脑中APP的β-分泌酶裂解途径上调,从而导致Aβ生成增加,出现类似AD的病理改变。3 DM大鼠脑中C26:0水平增加气相色谱结果显示,DM组C26:0水平(44.90±13.94μmol/g tissue)较Con组(18.38±6.29μmol/g tissue)显著升高,差异有统计学意义(P0.001);C22:0、C24:0含量在DM组与Con组之间差异无统计学意义(P0.05)。表明,糖尿病大鼠脑极长链脂肪酸C26:0水平增加。4 DM大鼠脑中C26:0水平与Aβ含量呈正相关相关分析结果显示,脑组织C26:0水平与Aβ含量呈正相关(r=0.557,P=0.016)。表明,糖尿病大鼠脑C26:0水平增加与Aβ生成增加有关。5 DM大鼠脑氧化应激增强TBA结果显示,DM组脑组织MDA的含量(2.19±0.27 nmol/mg protein)较Con组(1.83±0.19 nmol/mg protein)明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示,DM组大鼠脑组织氧化应激指标NOX4,p47和HO-1的蛋白表达水平均高于Con组。表明,糖尿病大鼠脑氧化应激水平增强。6 DM大鼠脑中C26:0水平与MDA含量呈正相关相关分析结果显示,脑组织C26:0水平与MDA含量呈正相关(r=0.504,P=0.033)。表明,糖尿病大鼠脑C26:0水平增加与氧化应激水平增强有关。结论:1 2型糖尿病大鼠的认知功能障碍与脑中C26:0增加所引起的Aβ增加有关。2 Aβ的增加与氧化应激引起的APP和BACE1的表达上调有关。
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R587.1

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 Mario Barbagallo;Ligia J Dominguez;;Type 2 diabetes mellitus and Alzheimer's disease[J];World Journal of Diabetes;2014年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 曹积萍;陈兰英;刘春梅;任佳伟;陈廷玥;宋淑怡;;2型糖尿病伴轻度认知功能障碍患者血清生物标志物分析[J];中外医学研究;2016年13期
2 李晓冰;任玉梅;陈玉龙;展俊平;谢忠礼;张月腾;王君明;李瑞琴;;当归芍药散对糖尿病大鼠认知障碍及海马组织病变的影响[J];时珍国医国药;2016年02期
3 胡进;黄金;张艳;王丽萍;赖冰玉;李蓓;赵雪;;认知训练对糖尿病合并轻度认知障碍患者认知功能的影响[J];中国护理管理;2015年09期
4 裴双超;艾静;;糖尿病与阿尔茨海默病的相关性研究进展[J];神经药理学报;2015年04期
5 朱滨;杨春;丁洁;刘宁;华飞;;白藜芦醇对链脲菌素所致糖尿病大鼠认知功能障碍的影响[J];齐齐哈尔医学院学报;2015年07期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;1998年10期
2 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;1998年01期
3 仝小林;;糖尿病9问(上)[J];药物与人;2007年03期
4 王秋月,刘国良;生活习惯与糖尿病[J];医师进修杂志;2000年09期
5 陈广耀;抗糖尿病中药开发前景展望[J];中国新药杂志;2000年07期
6 太田康晴,庄祥云;糖尿病[J];日本医学介绍;2000年08期
7 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;2000年06期
8 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;2000年08期
9 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;2000年11期
10 林兰;倪青;董彦敏;;糖尿病中西医结合研究的思路与方法[J];医学研究通讯;2001年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吴东方;庄跃宏;陈秀芳;赵丽娜;杨晓东;唐茂林;;胰岛素依赖型糖尿病对大鼠随意皮瓣存活能力的影响[A];中国解剖学会2012年年会论文文摘汇编[C];2012年
2 崔瑾;韩姣姣;李凤翱;李凤翱;汤绍芳;刘萍;邱明才;张鹏;;1,25-二羟维生素D3对糖尿病大鼠肺脏病变的保护作用[A];中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2013年
3 郑滨珠;袁凤山;杨润桥;;自体干细胞激活疗法治疗糖尿病大鼠过程中血细胞及生化改变[A];中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2013年
4 刘铜华;吕仁和;高彦彬;;中医药防治糖尿病及并发症的作用途径[A];糖尿病(消渴病)中医诊治荟萃——全国第五次中医糖尿病学术大会论文集[C];1999年
5 石凤英;王尧;;灵芝对糖尿病大鼠肾脏形态学及微量白蛋白尿的作用[A];中国康复医学会第三次康复治疗学术大会论文汇编[C];2002年
6 陈名道;李荣英;邵莉;;糖尿病饮食治疗的若干进展[A];中国营养学会第九次全国营养学术会议论文摘要汇编[C];2004年
7 仝小林;李洪皎;;糖络并重治疗2型糖尿病[A];第九次全国中医糖尿病学术大会论文汇编[C];2006年
8 李筱荣;李艳;刘巨平;袁佳琴;;糖尿病大鼠血—视网膜屏障损伤的实验研究[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
9 杨毅;陈江华;王晶晶;秦岭;;雷帕霉素对糖尿病大鼠肾脏组织增殖和肥大的抑制作用[A];2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编[C];2007年
10 祁少海;刘坡;舒斌;谢举临;徐盈斌;黄勇;毛任翔;刘旭盛;;不同深度糖尿病大鼠烫伤模型的制备[A];第八届全国烧伤外科学年会论文汇编[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 郭赛珊 梁晓春 潘明政;中西医结合治疗糖尿病慢性并发症可显著改善症状[N];中国中医药报;2007年
2 本报记者 王乐羊;中西医结合防治糖尿病大有可为[N];中国中医药报;2002年
3 北京协和医院 梁晓春;对中医治糖尿病并发症研究的思考[N];中国中医药报;2011年
4 刘燕玲;肥胖是糖尿病的源头[N];健康报;2006年
5 仝小林;糖尿病慢性并发症论治[N];中国中医药报;2003年
6 汪敏;糖尿病皮肤易损元凶找到[N];卫生与生活报;2003年
7 林兰;中西医结合治疗糖尿病的前景[N];中国中医药报;2007年
8 北京协和医院中医科主任 梁晓春;糖尿病周围神经病变的中西医治疗进展[N];中国医药报;2009年
9 本报记者 刘艳芳;糖尿病干预不能忽视抗氧化[N];中国食品报;2012年
10 谭小月;糖尿病与肾病关系研究的新进展[N];中国中医药报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 冯伟伟;苹果酸铬对2型糖尿病大鼠的降血糖活性、作用机制及安全性初探[D];江苏大学;2015年
2 刘宇;糖尿病来源的骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死的相关研究[D];第四军医大学;2015年
3 李维辛;GLP-1受体激动剂治疗糖尿病的循证评价和对糖尿病大鼠胃动力影响的机制研究[D];兰州大学;2012年
4 田丽;糖尿病周围神经病运动纤维的早期评价[D];天津医科大学;2014年
5 柳忠豪;糖尿病对口腔种植体骨整合影响的作用机制研究[D];山东大学;2015年
6 李波;饱和富氢液对糖尿病神经病变的保护作用及机制研究[D];天津医科大学;2015年
7 米佳;Vaspin调控糖尿病炎症通路及苦酸通调法的干预机制研究[D];长春中医药大学;2015年
8 林宣佑;从SCAP/SREBP脂代谢信号转导途径探讨苦酸通调方调控2型糖尿病胰岛素抵抗的作用机制[D];长春中医药大学;2015年
9 齐月;木丹颗粒治疗痛性糖尿病周围神经病变的实验研究[D];辽宁中医药大学;2015年
10 王云;糖基化终末产物介导的平滑肌病变在糖尿病结肠动力障碍中的作用研究[D];南京医科大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 田宝明;低血糖指数挂面的研制及其对糖尿病大鼠糖脂代谢影响的研究[D];西南大学;2015年
2 黄琼;姜黄素对糖尿病大鼠肺组织损伤的保护作用及其可能机制[D];湖北科技学院;2015年
3 褚淑蕾;PI3k-Akt信号通路在2型糖尿病大鼠易发心房颤动中的介导作用[D];福建医科大学;2015年
4 石鹰;二膦酸盐对糖尿病大鼠下颌骨骨折愈合影响的实验研究[D];河北联合大学;2014年
5 郑嫦;CNP对Ach引起的糖尿病大鼠胃平滑肌收缩增强的影响及IGF-1的干预效应[D];延边大学;2015年
6 李宁;益气养阴活血方对糖尿病大鼠大血管NF-κB表达的影响[D];河北医科大学;2015年
7 王婉秋;辛伐他汀对2型糖尿病动脉硬化大鼠血浆VEGF、TGF-β1及CTRP3水平的影响研究[D];石河子大学;2015年
8 宋倩;2型糖尿病患者血清TLR-4水平与骨密度及影响因素关系研究[D];河北医科大学;2015年
9 王丽霞;TLR4及相关炎症因子在糖尿病大鼠心脏、肝脏和肾脏中的表达[D];河北医科大学;2015年
10 孙雪培;极长链脂肪酸与2型糖尿病大鼠脑Aβ生成的关系研究[D];河北医科大学;2015年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026