收藏本站
《承德医学院》 2017年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

二甲双胍对A431细胞抑制作用及NF-κB/P65、c-MYC表达的影响

杜镇  
【摘要】:目的:随着经济社会的发展以及环境的变化,皮肤鳞状细胞癌(SCC)不仅在我国而且在世界范围内的发病率逐年升高,这给人类的健康造成了巨大的威胁。目前对于SCC的治疗主要以手术及放射治疗为主,而药物治疗方面疗效欠佳。双胍类药物二甲双胍是广泛用于临床治疗II型糖尿病的药物。有针对糖尿病患者的流行病学研究分析表明二甲双胍的使用与降低各种类型的实体肿瘤发病率具有显著相关性。由于二甲双胍能够增强人体对胰岛素的敏感性同时降低对葡萄糖的吸收,因此对糖代谢有关的肿瘤细胞具有抑制作用。随着研究的不断的深入,二甲双胍对体内外抗肿瘤活性方面的作用越来越受到人们的重视。研究证实二甲双胍能够抑制小鼠SCC肿瘤的生长,但其抑制肿瘤细胞生长和诱导癌细胞凋亡的机制尚未完全阐明。核转录因子(NF-κB)控制许多关键生理反应基因的表达,包括免疫和急性期炎症反应、细胞粘附、分化、氧化应激反应和细胞凋亡。而p65作为NF-κB家族重要的成员之一,在许多肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。其在A431肿瘤细胞中也广泛表达。而c-myc作为NF-κB的下游基因过表达对肿瘤细胞的增殖及转移起着很大的作用。因此本实验通过探讨二甲双胍对A431肿瘤细胞的抑制作用及p65、p-p65、c-myc表达的影响,探寻二甲双胍对SCC作用的新机制。方法:1细胞来源:本实验使用的细胞来源于人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431.2实验分组及干预:实验以IMDM培养基中二甲双胍的药物浓度不同进行分组,设1m M、2.5m M、5m M、10m M共4个实验组。以不加药物组为对照组。3采用CCK-8法检测各组细胞在24h、48、72h OD值,计算出细胞增殖抑制率。4采用免疫荧光检测对照组与10m M组细胞中p65的表达。5采用蛋白质免疫印迹(western blot)技术检测各组细胞总蛋白中p65、胞浆中p65、细胞核中p-p65及c-myc的蛋白表达量。6采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术检测各组细胞中p65、c-myc基因转录水平表达。7统计学分析:采用SPSS19.0软件统计分析,计量资料采用(?)±s表示,并采用单因素方差分析,组间的两两比较采用SNK-q检验,以P0.05为差异有统计学意义。结果:1在同样的时间下,二甲双胍的药物浓度(1m M、2.5m M、5m M、10m M)的增加A431细胞的抑制率的影响:从对照组与10m M的药物浓度组24h及72h细胞的形态比较发现二甲双胍对A431细胞增殖有明显的抑制作用。药物刺激24h后,各组抑制率分别为:(5.18±0.76)%、(8.05±2.08)%、(14.39±1.77)%、(17.85±0.60)%,组间差异具有统计学意义(F=63.913,P=0.0000.05)。药物刺激48h后,各组抑制率分别为:(7.79±0.27)%、(11.97±0.70)%、(19.14±0.80)%、(32.06±2.07)%,组间差异具有统计学意义(F=330.990,P=0.0000.01)。药物刺激72h后,各组抑制率分别为:(9.27±0.70)%、(14.93±1.32)%、(21.31±0.95)%、(37.09±2.80)%,组间差异具有统计学意义(F=209.890,P=0.0000.01)。可见在同一时间下二甲双胍对细胞抑制率的影响具有一定的浓度依赖性。2在相同药物浓度刺激下,随着时间的增加,药物对细胞的影响:1m M组:24h、48h、72h细胞抑制率差异有统计学意义(F=45.532,P=0.0000.01),2.5m M组:24h、48h、72h细胞抑制率差异有统计学意义(F=21.806,P=0.0000.01),5m M组:24h、48h、72h细胞抑制率差异有统计学意义(F=32.237,P=0.0000.01),10m M组:24h、48h、72h细胞抑制率差异有统计学意义(F=95.631,P=0.0000.01)。可见在相同药物浓度刺激下,二甲双胍对细胞的抑制率具有时间的依赖性。3免疫荧光实验观察二甲双胍作用于细胞后,p65在细胞核及细胞浆的分布情况:二甲双胍处理细胞24小时后,可见10m M药物浓度的细胞核中p65的表达明显少于对照组。4药物刺激细胞24h后随着药物浓度(0m M、1m M、2.5m M、5m M、10m M)的增加对细胞总蛋白p65蛋白表达的影响:各组蛋白相对表达量分别为:1.11±0.07、1.09±0.06、0.93±0.04、0.92±0.04、0.43±0.03,组间差异有统计学意义(F=89.018,P=0.0000.01)。可见随着药物浓度的增加总蛋白p65的相对表达量下降,具有浓度依赖性。5药物刺激细胞24h后随着药物浓度(0m M、1m M、2.5m M、5m M、10m M)的增加对细胞浆p65蛋白表达的影响:各组蛋白相对表达量分别为:0.50±0.04、0.53±0.02、0.78±0.04、0.79±0.03、0.82±0.02,组间差异有统计学意义(F=76.789,P=0.0000.01)。可见随着药物浓度的增加胞浆p65的相对表达量升高,具有一定的浓度依赖性。6药物刺激细胞24h后随着药物浓度(0m M、1m M、2.5m M、5m M、10m M)的增加对细胞核p-p65蛋白表达的影响:各组蛋白相对表达量分别为:0.22±0.01、0.18±0.02、0.17±0.01、0.14±0.02、0.12±0.01,组间差异有统计学意义(F=23.844,P=0.0000.01)。可见随着药物浓度的增加细胞核p-p65的相对表达量下降,具有浓度依赖性。7药物刺激细胞24h后随着药物浓度(0m M、1m M、2.5m M、5m M、10m M)的增加对细胞核中c-myc蛋白表达的影响。各组蛋白相对表达量分别为:0.85±0.07、0.79±0.06、0.50±0.02、0.27±0.04、0.18±0.03,组间差异有统计学意义(F=130.910,P=0.0000.01)。可见随着药物浓度的增加细胞核c-myc的相对表达量下降,具有浓度依赖性。8 q RT-PCR技术检测不同浓度的二甲双胍(0m M、1m M、2.5m M、5m M、10m M)对A431细胞中p65 m RNA的相对表达量分别为:1.00±0.00、0.85±0.12、0.60±0.13、0.51±0.14、0.24±0.09。组间差异有统计学意义(F=22.808,P=0.0000.01)。c-myc m RNA的相对表达量分别为:1.00±0.00、0.83±0.05、0.70±0.07、0.70±0.16、0.44±0.13。组间差异有统计学意义(F=13.208,P=0.0010.01)。结论:1二甲双胍对A431细胞增殖具有抑制作用2二甲双胍可降低p65、c-myc在A431细胞中的表达,并可抑制p65的磷酸化。
【学位授予单位】:承德医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R739.5

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 高天文,孙东杰,李春英,何弘,李青,刘友生,刁庆春,黄高升,郝飞,钟白玉,马福成,柳凤轩,闫小初,刘东梅,刘玉峰,刘荣卿;中国西部两医院1905例皮肤恶性肿瘤回顾分析[J];北京大学学报(医学版);2004年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 曲昌锋;汪崇;杨建;李德新;王有为;;3种邻位皮瓣修复头面部肿瘤切除术后皮肤缺损的疗效分析[J];大连医科大学学报;2017年05期
2 王露;陈华全;陈丽;;面部溃疡型鳞状细胞癌1例[J];中国皮肤性病学杂志;2017年09期
3 万学峰;张丽娟;樊俊威;帕丽达·阿布力孜;;皮肤恶性肿瘤574例回顾性分析[J];中国皮肤性病学杂志;2017年09期
4 陈方如;蒙坚;严文杰;杨凤元;刘群英;程培华;黄熙;;桂北地区216例皮肤恶性肿瘤及癌前病变临床回顾性分析[J];实用皮肤病学杂志;2016年06期
5 汪锋;刘忠艳;;力学在颜面部皮肤外科手术中的应用初探[J];山东医学高等专科学校学报;2016年05期
6 方勇;邹勇莉;邹旭辉;粟丽雷;邹丹丹;;RUNX3蛋白在日光性角化病、鲍恩病及鳞状细胞癌中的表达及意义[J];临床皮肤科杂志;2016年05期
7 李玉湘;傅强;张秀春;杜丽霞;;青海地区122例皮肤恶性肿瘤临床分析[J];中国皮肤性病学杂志;2016年03期
8 门月华;张倩;张宝元;张春雷;;单发性皮肤肿瘤4695例回顾性分析[J];北京大学学报(医学版);2016年02期
9 邹齐;陈羽佳;王大广;所剑;;恶性黑色素瘤胃转移1例[J];中国实验诊断学;2016年02期
10 顾静;刘保国;周萌;刘青;;皮肤恶性肿瘤及癌前病变946例临床分析[J];中国皮肤性病学杂志;2016年02期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 何勤,涂平,马圣清,伍玲慎;皮肤恶性肿瘤及癌前病变707例统计分析[J];中华皮肤科杂志;2003年02期
2 李树业,王远,门伯媛,张木槿,杨琪;陕西宝鸡地区恶性肿瘤发病及死亡调查分析[J];肿瘤防治研究;1998年02期
3 葛来增,尹永学,王朝峰;冷冻治疗皮肤癌1039例分析[J];肿瘤防治研究;1997年02期
4 陈丽芳,史维平,王宇芳;皮肤活组织检查发现的恶性病变之分析[J];山西医药杂志;1996年04期
5 ;1993年上海市市区居民恶性肿瘤发病率统计[J];肿瘤;1996年03期
6 孙桂珍,张宗琴,朱晓琳,蓝毓滨,李春梅,宁晓明;皮肤鳞状细胞癌、基底细胞癌、恶性黑素瘤449例统计分析[J];临床皮肤科杂志;1995年01期
7 喻伦银,刘汉桥,徐江,孙洁,邹祖玉,夏东;1981~1992年恶性肿瘤7840例临床病理分析[J];湖北医科大学学报;1995年01期
8 马在墀,杨茨颖;皮肤恶性肿瘤236例分析[J];中国医科大学学报;1982年03期
9 常宝珠;李光中;;在江苏泰州地区见到的皮肤恶性肿瘤[J];中华皮肤科杂志;1991年03期
10 丘钜世;刘子君;王义敬;李淑兰;许俊业;徐淑贤;汪德汉;;3,425例表皮、附件肿瘤及瘤样病变的病理统计分析[J];中华肿瘤杂志;1986年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 蔡文君;张晶;海尔尼沙;;二胛双胍治疗非酒精性脂肪肝病的疗效观察[J];兵团医学;2008年01期
2 成杰;蔡明江;贾永莉;尹照华;;二甲双胍的应用现状调查[J];实用糖尿病杂志;2005年06期
3 潘明政;;二甲双胍伤肾吗[J];医药与保健;2008年11期
4 衡先培;;二甲双胍的临床应用[J];中国乡村医药;2006年02期
5 H.Mehnert,邵丙扬;二甲双胍在糖尿病治疗中的地位[J];The Chinese-German Journal of Clinical Oncology;1999年02期
6 王煜;;二甲双胍的临床应用疗效评析[J];药品评价;2012年10期
7 伍晓玲,梁常禧,罗碧云;诺和灵与甲双胍强化治疗2型糖尿病22例效果观察及护理[J];右江民族医学院学报;2002年04期
8 陈凌;二甲双胍的临床应用体会[J];山东医药;1994年06期
9 赵红玲;张雪坤;;二甲双胍的降糖外作用研究进展[J];医学理论与实践;2011年16期
10 ;古老的药物 崭新的应用[J];科技传播;2011年17期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 侯沃霖;张丹丹;刘芳;陆蔚;殷峻;李鸣;卢逢娣;包玉倩;贾伟平;;二甲双胍可降低女性2型糖尿病患者的血清CA125水平[A];中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2013年
2 朱云云;冯怡;沈岚;王彬;阮克峰;从文娟;;二甲双胍预防2型糖尿病的尿液代谢组学研究[A];2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周论文集[C];2012年
3 安慧杰;魏蕊;杨进;王广;洪天配;;二甲双胍促进血管内皮一氧化氮合酶复偶联的作用及其机制[A];中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2013年
4 杜云波;赵英萍;;二甲双胍致糖尿病乳酸性酸中毒12例的临床分析[A];中国病理生理学会危重病医学专业委员会第八届全国大会暨中华呼吸病学会呼吸生理和重症监护学组年会论文集[C];2008年
5 郭力;李显筑;王梅;;二甲双胍对糖尿病患者心血管危险因素的影响及其机理探讨[A];中华医学会第六次全国内分泌学术会议论文汇编[C];2001年
6 张丹丹;刘芳;唐峻岭;郑泰山;陆慧娟;谢君;卢逢娣;包玉倩;贾伟平;;2型糖尿病患者血清CA199水平的性别差异及二甲双胍对其影响[A];中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2013年
7 吴加华;周嘉强;;二甲双胍对葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的抑制作用及其机制[A];2013年(第三届)中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛论文摘要[C];2013年
8 吴加华;周嘉强;;二甲双胍对葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的抑制作用及其机制[A];中国药理学与毒理学杂志(2013年6月第27卷第3期)[C];2013年
9 王述进;;二甲双胍对2型糖尿病患者血清c反应蛋白水平的影响[A];全国首届代谢综合征的基础与临床专题学术会议论文汇编[C];2004年
10 安慧杰;刘金波;柯静;王广;洪天配;;二甲双胍逆转波动性高糖诱导的内皮细胞功能失调的机制研究[A];中华医学会第十一次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 秦家珍;服二甲双胍监测肾功能[N];医药养生保健报;2007年
2 健康时报实习记者 井超;缓释降糖药别掰开吃[N];健康时报;2009年
3 钱荣立;二甲双胍不是减肥药[N];健康报;2003年
4 王欣;二甲双胍的临床新用[N];医药养生保健报;2006年
5 彦珉;二甲双胍的“后现代生活”[N];医药经济报;2008年
6 徐述湘;50年应用 二甲双胍成为降糖经典药物[N];中国医药报;2008年
7 章潮忠 袁克俭;“老当益壮”的二甲双胍[N];健康报;2006年
8 韩咏霞;五种情况慎用二甲双胍[N];医药经济报;2008年
9 裘影萍;特殊人群慎服二甲双胍[N];医药经济报;2009年
10 健康时报记者 戴志悦;服二甲双胍别喝酸奶[N];健康时报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姚新明;二甲双胍对糖尿病肾脏疾病的保护作用及机制探讨[D];安徽医科大学;2014年
2 许国顺;二甲双胍对造血免疫系统辐射损伤防护作用及分子机制研究[D];北京协和医学院;2013年
3 汪莉;二甲双胍对奥氮平致精神分裂症体重增加者肝脏脂肪含量的影响[D];第二军医大学;2015年
4 刘瑛;二甲双胍通过mTOR信号通路对Hacat角质形成细胞增殖的影响[D];山东大学;2015年
5 赵彬;二甲双胍调节脑胶质瘤周围脑水肿的机制研究[D];吉林大学;2016年
6 韦德华;p53、线粒体基因多态性与二甲双胍辅助卵巢癌化疗增敏关系研究[D];郑州大学;2016年
7 李薇薇;二甲双胍通过降低miR-34a抵抗心肌缺血再灌注损伤[D];河北医科大学;2017年
8 李达周;二甲双胍对结直肠肿瘤预防作用的研究[D];第二军医大学;2016年
9 余昕烊;二甲双胍对妊娠期糖尿病小鼠母代和跨代代谢功能的影响及机制[D];重庆医科大学;2017年
10 罗翠松;二甲双胍对乙型肝炎病毒相关肝癌合并糖尿病患者的预后影响及机制研究[D];南昌大学;2016年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 许斌斌;二甲双胍、塞来昔布对小鼠结直肠肿瘤预防作用的研究[D];福建医科大学;2015年
2 王槐文;二甲双胍联合放疗诱导结直肠癌细胞凋亡的分子机制研究[D];福建医科大学;2015年
3 刘佳;二甲双胍对糖尿病大鼠的骨保护作用与内质网应激的关系[D];福建医科大学;2015年
4 王静璐;二甲双胍通过调节EGFR信号通路抑制子宫内膜癌细胞增殖的研究[D];郑州大学;2015年
5 史明星;二甲双胍对子宫内膜癌细胞系脂联素表达的影响[D];郑州大学;2015年
6 彭铮;二甲双胍通过p38MAPK信号通路抑制ERCC1基因逆转卵巢癌细胞的顺铂耐药性[D];郑州大学;2015年
7 王涛;二甲双胍对人食管癌细胞系KYSE450增殖和凋亡的影响及其机制[D];郑州大学;2015年
8 马彦荣;基于Octs和Mate1分别探究阿替洛尔和美托洛尔对大鼠二甲双胍药动学的影响[D];兰州大学;2015年
9 孟祥丽;二甲双胍增加食管鳞癌对顺铂化疗敏感性的机制研究[D];新乡医学院;2015年
10 丁跃;二甲双胍对人网膜脂肪细胞中v-SNAREs家族表达的影响[D];山西医科大学;2015年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026