收藏本站
《河北师范大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

白芷细胞外钙调素结合蛋白(ECBP21)cDNA克隆及鉴定

毛国红  
【摘要】: 目前,对植物Ca~(2+)信号系统各组分(Ca~(2+)、CaM和CaMBPs等)的研究不断取得更为深入的成果。在植物细胞内鉴定了许多CaM调节或结合的靶酶或靶蛋白(CaBMPs),并证明它们在Ca~(2+)-CaM信号转导途径中发挥重要作用,参与了许多生命活动过程。我室多年的研究证实植物细胞外也普遍存在CaM,并且可能作为一种多功能肽类信使在植物生长发育过程中发挥重要作用。这已成为植物钙调素研究的最新进展之一。 我室在对植物细胞外CaM的研究过程中,发现细胞外还可能存在CaMBPs,并首次从白芷悬浮培养细胞外纯化了一种依赖Ca~(2+)的、分子量约为21kD的细胞外CaMBP(Tang等,1996)(定名为:ECBP21)。生理实验初步表明ECBP21影响白芷悬浮培养细胞的增殖(毛国红等,1999)。这些生物化学和生理学实验,仅为细胞外CaMBPs的存在及可能的功能提供了初步证据。为了进一步利用分子生物学手段证实细胞外ECBP21真实存在,并进一步研究其生物学功能,本实验从克隆基因入手进行了以下工作: 1.ECBP21全长cDNA克隆:将纯化的ECBP21蛋白经SDS—PAGE分离后电转移到PVDF膜上,氨基酸测序获得N-末端20个氨基酸序列;根据N-末端8个氨基酸序列合成兼并性引物,通过RT-PCR和5’-RACE方法,获得其cDNA序列。Northern blot分析表明克隆的cDNA序列为全长cDNA。ECBP21 cDNA全长947bp,编码216个氨基酸,序列分析显示其N端1-25氨基酸为信号肽,26-216氨基酸为成熟蛋白肽段,并且不具有跨膜结构域。将此cDNA成熟蛋白编码区核苷酸片断构建到pET-28b(+)表达载体,在大肠杆菌表达系统中诱导了该蛋白的表达,经CaM-gel overlay检测证实表达蛋白具有Ca~(2+)依赖的CaM结合特性,从而进一步证实了ECBP21为一种Ca~(2+)依赖的CaMBP。通过缺失表达分析实验证实CaMBD结构域位于ECBP21的羧基端。Southern blot检测表明白芷基因组中可能存在两个ECBP21基因拷贝。从而首次克隆并鉴定了一个细胞外CaMBP的全长cDNA。 2.ECBP21亚细胞定位:以重组ECBP21蛋白为抗原制备了特异性抗体。利用特异性抗体通过免疫金标定位研究表明ECBP21主要分布于细胞壁。进一步利用GFP荧光标记,通过瞬时表达方法研究显示转ECBP21-GFP 毛国红:白芷细胞外钙调素结合蛋白(ECBPZI)cDNA克隆及鉴定 融合基因细胞的细胞壁上有较强绿色荧光,而转缺失信号肤的 乙去乙岁苍介分户融合基因及贷尹基因的细胞中,细胞壁上无绿色荧光,表 明ECBP21是一种主动分泌到细胞外的分泌蛋白。由此进一步证实ECBP21 确为一种质外体多肤。本实验为细胞外CaMBPS的存在提供了直接证据。 3.ECBP21表达分析:Northern blot分析表明:在白芷悬浮培养细 胞生长周期中,ECBP21和CaM都为组成型表达,0一12天ECBP21表达量 逐渐增加,第12天达到最高,随后12一21天,ECBP21表达量稍有下降, 维持在一个比较稳定状态;而O一6天时,CaM表达量逐渐上升,第6一9 天达到最大表达量,随后,9一21天,CaM表达量有所下降。表明ECBP21 可能参与白芷悬浮培养细胞生长周期调控。热激、渗透、盐胁迫及JA处 理时,ECBPZI表达量下降,而6一BA、ABA及GA3处理时,不影响ECBPZI 的表达。推测ECBP21还可能与逆境胁迫相关。 4.初步开展了转基因研究:为了进一步确定ECBP21在植物生长发 育过程中的作用,构建了ECBP21植物表达二元载体,通过真空渗透法转 化了拟南芥并获得了转基因植株。表型观察仍在进行之中。 总之,通过上述研究我们首次克隆及鉴定了一种细胞外CaMBP (EC即21) CDNA,并首次提供了细胞外存在CaMBPS的直接证据。本实验 结果也为利用分子生物学方法研究ECBP21的生物学功能奠定了基础,并 将有助于阐明胞外 CaM的作用机制及丰富植物质外体多肤的研究。
【学位授予单位】:河北师范大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:Q785

手机知网App
【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 万东莉;CBP60g正调控拟南芥对丁香假单胞菌、脱落酸和干旱的响应[D];内蒙古农业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 张新;生物和非生物胁迫条件下拟南芥AtCBP60g表达特性研究[D];内蒙古农业大学;2010年
2 李瑞丽;拟南芥SCBP60g蛋白的表达模式及其功能研究[D];内蒙古农业大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 叶正华,孙大业,郭季芳;小麦细胞壁钙调素的研究初报[J];科学通报;1988年08期
2 凌启阆;李翠凤;尚克进;任丽英;杜立林;葛常辉;;CaM BP-10对生长素诱导的小麦芽鞘伸长及介质酸化的抑制作用[J];科学通报;1993年21期
3 赵宝华,孙大业,赵连元;外源钙调素对珍珠粟原生质体持续分裂的影响[J];科学通报;1994年14期
4 孙大业,唐军,李红兵;细胞外钙调素的研究及其意义[J];科学通报;1995年13期
5 孙大业;兼有胞内、胞外功能的信号分子的普遍性及生物学意义[J];科学通报;1999年15期
6 马力耕,孙大业;植物细胞多肽第一信使[J];科学通报;2000年18期
7 马力耕,周君莉,张素巧,刘强,孙大业;细胞外钙调素对转基因烟草悬浮细胞rbcS-GUS基因表达的促进作用[J];科学通报;2000年19期
8 郭毅,马力耕,张璐,孙大业;异三聚体G蛋白在细胞外钙调素调控rbcS基因表达中的作用[J];科学通报;2000年20期
9 赵鸿娟,朱玉贤;外源钙调蛋白对植物细胞分裂增殖作用的研究[J];生物化学杂志;1996年04期
10 马力耕,崔素娟,徐小冬,孙大业;G蛋白在细胞外钙调素启动花粉萌发和花粉管伸长中的作用[J];自然科学进展;1997年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 沈雪梅;;植物G蛋白的种类及异三聚体G蛋白在植物细胞信号转导中的作用[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年15期
2 汤红明;徐冬青;徐根娣;刘鹏;;植物花粉萌发的研究进展[J];安徽农业科学;2006年24期
3 郝立华;王伟霞;王灵敏;尚忠林;;植物异三聚体G蛋白在细胞信号转导中的作用机制研究进展[J];安徽农业科学;2009年04期
4 姚清国;张文娜;周二鹏;王娟;罗永忠;;植物花粉胞外蛋白的研究进展[J];安徽农业科学;2011年01期
5 杨丽芬;李学斌;韩芬霞;张晓建;任斐;;转基因烟草蛋白表达系统的研究进展[J];安徽农业科学;2011年07期
6 姚清国;周二鹏;王娟;张文娜;王景翔;;通过酵母双杂交筛选水稻类受体激酶CR4的胞外结合蛋白[J];安徽农业科学;2011年08期
7 张媛华;王超;;G蛋白在植物中的研究进展[J];安徽农业科学;2012年05期
8 张燕红,张庭芳;蚯蚓钙调素结合蛋白的研究[J];北京大学学报(自然科学版);1997年06期
9 甘露;邱云志;苏德华;王志玲;勾凌燕;;细胞外钙调素对细胞增殖的影响研究进展[J];白求恩军医学院学报;2006年04期
10 赵美琳,徐启红;CaM的特性与研究方法探讨[J];四川职业技术学院学报;2005年02期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 ;Calmodulin-binding protein kinases in plants[A];2005'海峡两岸植物生理与分子生物学教学研讨会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 黄亚辉;茶树种质间谷氨酸脱羧酶活性差异及γ-氨基丁酸茶的研究[D];中南林业科技大学;2010年
2 史瑞新;弱激光照射对受张力的成骨样细胞的早期影响及信号转导机制的研究[D];吉林大学;2011年
3 戴海英;钙信号转导途径在自体移植皮片过度色素沉着中的作用[D];第二军医大学;2011年
4 温若冰;噬菌体展示技术筛选藻毒素结合多肽、毒素调查及甲藻钙调蛋白基因的研究[D];中国海洋大学;2011年
5 范净;柑橘转GFP、AP1和LFY基因植株群体的分子鉴定与基因表达研究[D];华中农业大学;2010年
6 康恒;百脉根结瘤信号途径中相关调控蛋白的功能和作用机制的研究[D];华中农业大学;2011年
7 周围;基于微流控芯片的细胞内钙离子检测及细胞驱动技术的研究[D];河北工业大学;2010年
8 吴耿;西南岩溶地区典型植物适应岩溶高钙环境的机制[D];华中科技大学;2011年
9 程彦伟;盐胁迫诱导水稻根尖细胞质膜蛋白差异表达及LRR型受体蛋白激酶的功能研究[D];南京农业大学;2008年
10 郭建林;马铃薯StCOL和StTFL1的克隆及其在块茎形成中的功能分析[D];南京农业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 柳丽平;杜氏盐藻cDNA文库的构建与KCBP基因的克隆及功能分析[D];郑州大学;2010年
2 张华永;γ-氨基丁酸(GABA)对玉米幼苗抗逆性的效应、作用机理及调控[D];山东农业大学;2010年
3 李日红;微透析技术在植物活体取样中的应用研究[D];辽宁师范大学;2010年
4 岳文明;生物转化法制备薏苡仁抗高血压活性肽的研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
5 王伟;根癌农杆菌介导的CaNZ基因转化烟草的研究[D];中南林业科技大学;2007年
6 王保明;油茶亲环素、钙调素基因的cDNA克隆及亲环素基因的原核表达[D];中南林业科技大学;2008年
7 周慧;小麦—叶锈菌互作过程中钙调素下游蛋白的筛选[D];河北农业大学;2011年
8 兰敏娟;拟南芥NPCL基因调节花粉萌发和生长的机制分析[D];河北农业大学;2011年
9 李洋洋;AtCNGC2在茉莉酸信号通路中的作用[D];山东师范大学;2011年
10 王蕾;烟草磷脂酶C基因的表达模式和过表达NtPLC4转基因烟草提高抗病性研究[D];山东农业大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王晓丽;邵卫星;单虎;;绿色荧光蛋白研究进展[J];动物医学进展;2008年01期
2 余钗;史惠;赖汉漳;;高通量的基因克隆[J];动物医学进展;2008年01期
3 梅文倩,宋文强,潘怡,巩威,朱玉贤;利用Gateway克隆技术大规模克隆拟南芥转录因子[J];分子植物育种;2004年03期
4 吴瑞,张树珍;绿色荧光蛋白及其在植物分子生物学中的应用[J];分子植物育种;2005年02期
5 沙新平;报告基因系统的研究进展[J];国外医学(临床生物化学与检验学分册);2003年01期
6 韦莉莉,樊妙姬,陈丽梅;GUS基因概述[J];广西农业大学学报;1998年03期
7 夏快飞,梁承邺,叶秀粦;钙调素及钙调素相关蛋白在植物细胞中的研究进展[J];广西植物;2005年03期
8 宋春风,吕佩源,孙大业;钙调素结合蛋白定位研究进展[J];解剖科学进展;2000年01期
9 刘强,张贵友,陈受宜;植物转录因子的结构与调控作用[J];科学通报;2000年14期
10 詹红利;李翠风;祁倩;李国亮;凌启阆;;拟南芥钙调素结合蛋白cDNA克隆的分离和初步鉴定[J];南开大学学报(自然科学版);2006年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 岳荣;柠条锦鸡儿CBF/DREB1基因的克隆及其过表达对提高拟南芥抗旱、抗冻能力的影响[D];内蒙古农业大学;2011年
2 肖逸群;一种编码拟南芥钙调素结合蛋白基因的载体构建及其初步表达[D];华中师范大学;2007年
3 卢慧星;拟南芥AtCDPK1参与非生物胁迫响应和ABA信号途径的证据[D];内蒙古农业大学;2009年
4 张新;生物和非生物胁迫条件下拟南芥AtCBP60g表达特性研究[D];内蒙古农业大学;2010年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 万永青;李瑞丽;邹博;万东莉;王瑞刚;李国婧;;拟南芥SCBP60g蛋白的亚细胞定位及其功能研究[J];中国生物工程杂志;2013年09期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 万东莉;CBP60g正调控拟南芥对丁香假单胞菌、脱落酸和干旱的响应[D];内蒙古农业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前8条
1 高阳;拟南芥VHA-c基因对生物胁迫和非生物胁迫的响应[D];内蒙古农业大学;2011年
2 岳荣;柠条锦鸡儿CBF/DREB1基因的克隆及其过表达对提高拟南芥抗旱、抗冻能力的影响[D];内蒙古农业大学;2011年
3 张娜;拟南芥紫色酸性磷酸酶AtPAP2和AtPAP9对磷胁迫的响应[D];内蒙古农业大学;2011年
4 杨冠宇;拟南芥蛋白激酶AtPKL1对ABA和Ca~(2+)处理的响应[D];内蒙古农业大学;2011年
5 李瑞丽;拟南芥SCBP60g蛋白的表达模式及其功能研究[D];内蒙古农业大学;2012年
6 白肖飞;农杆菌介导大豆转化系统的建立[D];内蒙古农业大学;2012年
7 石蕊;拟南芥CRK45的亚细胞定位及其对钙离子和糖处理的响应[D];内蒙古农业大学;2012年
8 刘贞;组成型和可诱导型启动子驱动的AtCDPK1过表达增强拟南芥对干旱和盐胁迫的抗性[D];内蒙古农业大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 唐军,孙大业;白芷悬浮培养细胞外21KD钙调素结合蛋白的鉴定及纯化[J];河北师范大学学报;1994年02期
2 周君莉,崔素娟,郭毅,马力耕,孙大业;胞外钙调素对转基因烟草rbcs基因表达的调控[J];河北师范大学学报;1997年03期
3 周君莉,马力耕,孙大业;G-蛋白和cGMP在光敏色素介导的尾穗苋苋红素合成中的作用[J];中国科学C辑:生命科学;1998年02期
4 马力耕,周君莉,安宜,崔国军,孙大业,HidakaHiroyoshi,Hidaka Hiroyoshi;Effect of calcium on phytochrome-mediated synthesis of amaranthin in Amaranthus caudatus seedlings[J];Chinese Science Bulletin;1995年17期
5 叶正华,孙大业,郭季芳;小麦细胞壁钙调素的研究初报[J];科学通报;1988年08期
6 李红兵,程刚,孙大业;细胞外钙调素对白芷悬浮培养细胞增殖的作用[J];科学通报;1992年19期
7 赵宝华,孙大业,赵连元;外源钙调素对珍珠粟原生质体持续分裂的影响[J];科学通报;1994年14期
8 孙大业,唐军,李红兵;细胞外钙调素的研究及其意义[J];科学通报;1995年13期
9 孙大业;兼有胞内、胞外功能的信号分子的普遍性及生物学意义[J];科学通报;1999年15期
10 马力耕,孙大业;植物细胞多肽第一信使[J];科学通报;2000年18期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘霞;林森;魏红山;陈京龙;;T7 cDNA噬菌体展示文库筛选乙型肝炎病毒前S2蛋白结合蛋白[J];中国病原生物学杂志;2007年01期
2 丁岗强;张君;杨凤;杨键;向光明;唐霓;黄爱龙;;HepG2细胞膜上乙型肝炎病毒前S1蛋白(preS1)结合蛋白的研究[J];中国生物工程杂志;2009年09期
3 邬光惠,韩志涛,吴蔚;糖在细菌致病中介导作用的研究——甘露聚糖及某些单糖抑制大肠杆菌在上皮细胞上的粘附作用[J];科学通报;1986年09期
4 李思经;;Genex生产重组单链抗体结合蛋白[J];生物技术通报;1989年06期
5 万寅生;唐剑栋;张能刚;周燮;杜念兴;;玉米根尖微粒体脱落酸结合蛋白的分离纯化与鉴定(简报)[J];植物生理学通讯;1991年05期
6 金宏,高兰兴,王宗印,许志勤;视黄醇结合蛋白的分离纯化及其抗血清的制备[J];生物化学与生物物理进展;1993年06期
7 金宏;视黄醇结合蛋白的结构与功能[J];生物化学与生物物理进展;1996年02期
8 吴忠义,陈珈,朱美君;光亲和标记鉴定玉米根脱落酸结合蛋白[J];生物化学与生物物理学报;1996年06期
9 李霞,程光宇,魏锦城;水稻Rubisco亚基结合蛋白的纯化及性质研究[J];南京师大学报(自然科学版);1997年04期
10 郝艳静,王科太,谢家理,冯立;聚合物NHS酯结合蛋白的研究[J];四川大学学报(自然科学版);2003年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王皓月;沈鹤柏;费俭;;磁性纳米粒子-dsDNA复合物的制备及其在分离dsDNA结合蛋白方面的应用[A];中国化学会第十一届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2007年
2 陈兆文;张铮铮;;生长激素治疗宫内发育迟缓矮小患儿的疗效与胰岛素生长因子-1、胰岛素生长因子结合蛋白-3的关系[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编(上册)[C];2010年
3 余优成;张志愿;陈万涛;周晓健;潘红芽;张萍;徐骎;;erbB-3结合蛋白ebp1对舌鳞癌细胞系Tca8113抑制作用的实验研究[A];2004年口腔颌面肿瘤基础研究学术研讨会会议日程及论文集[C];2004年
4 刘定干;孙丽;;C/EBPbeta mRNA 3'UTR专一结合蛋白的鉴定及其生物功能的探讨[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
5 梁建辉;;抗抑郁剂的跨膜信号转导[A];第四届中国新医药博士论坛论文集[C];1999年
6 丁一;吴景兰;;应用南西方杂交技术对大鼠肝校内、DNA校外结合蛋白的比较研究(一)[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
7 陈红梅;邝建;杨华章;崔炎棠;;2型糖尿病病人血清胰岛素样生长因子及其结合蛋白的变化[A];中华医学会第六次全国内分泌学术会议论文汇编[C];2001年
8 薛红卫;李李;杨晓华;;甾类激素在植物向性中的作用及其结合蛋白作用机理[A];2005年全国植物生长物质研讨会论文摘要汇编[C];2005年
9 李建薇;刘小菁;冉兴无;吴文超;程惊秋;田浩明;;固醇调节元件结合蛋白-1c激活与胰岛β细胞脂毒性有关[A];2008内分泌代谢性疾病系列研讨会暨中青年英文论坛论文汇编[C];2008年
10 臧建业;滕脉坤;牛立文;;江浙蝮蛇毒(Agkistrodon halys Pallas)IX因子结合蛋白的纯化、性质和初步晶体学研究[A];中国毒理学会生物毒素毒理专业委员会第4次、中国生物化学与分子生物学会毒素专业组第5次学术研讨会论文摘要[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 方彤 陈明莲;肝炎研究新途径——基因克隆化[N];健康报;2006年
2 ;韩国科学家发现胆固醇传输蛋白原理[N];中国高新技术产业导报;2005年
3 葛秋芳;英国:发现癌细胞扩散机制[N];医药经济报;2007年
4 胡德荣;“连接酶”研究发现降低胆固醇新靶点[N];健康报;2007年
5 ;上海科学家——发现调节胆固醇代谢新机制[N];上海科技报;2007年
6 ;喝茶加牛奶会影响茶的保健功效[N];中国中医药报;2007年
7 胡德荣;我国发现调节胆固醇代谢的新机制[N];中国医药报;2007年
8 葛秋芳;科学家发现癌细胞扩散机制,有助开发抗癌药[N];新华每日电讯;2007年
9 白毅;戎装论药亦风流[N];中国医药报;2005年
10 朱立明;新生儿缺氧缺血性脑病研究获成果[N];中国医药报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王瑜;渗透压反应元件结合蛋白在晶状体的作用[D];中国医科大学;2003年
2 胡晓年;正常人肝及人肝癌细胞中N-ras基因的表达调控[D];中国协和医科大学;1991年
3 孙洁;端粒结合蛋白在急性白血病细胞中的表达、突变和对端粒酶作用及机理研究[D];浙江大学;2004年
4 李晨;AF-1与UG结合蛋白相互作用及生物学意义的初步研究[D];中南大学;2008年
5 杨力军;酵母双杂交技术钓取人UROC28结合蛋白[D];第四军医大学;2002年
6 沈元月;脱落酸(ABA)结合蛋白基因克隆、表达及其产物对ABA的特异结合[D];中国农业大学;2003年
7 邹璇;NELL-1在成骨细胞中的功能机制研究及结合蛋白鉴定[D];浙江大学;2011年
8 张令强;c-Jun亮氨酸拉链结合蛋白(Jlip)对AP-1和ATM的调控研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
9 王晓东;人N端脂多糖结合蛋白(tLBP)基因的克隆表达及保护作用的研究[D];第三军医大学;2003年
10 洪焰;大鼠肝氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ基因5'端上游DNA特异结合蛋白的研究[D];中国协和医科大学;1989年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴煜;乙型肝炎病毒X基因启动子结合蛋白的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
2 罗玮;氧化固醇结合蛋白8诱导细胞凋亡并与人Sperm Associated Antigen 5关联[D];暨南大学;2011年
3 党刘毅;人糖结合蛋白的筛选、分离与鉴定[D];西北大学;2012年
4 柳忠旭;磷酸化胰岛素生长因子结合蛋白对四种癌细胞的影响[D];青岛大学;2002年
5 刘润先;维生素A结合蛋白基因的克隆及原核表达[D];内蒙古农业大学;2003年
6 靳松;孕激素及类胰岛素样生长因子结合蛋白在人孕早期的关系及相互作用[D];四川大学;2002年
7 李世燕;聚羟基脂肪酸酯颗粒结合蛋白PhaP的抗逆研究及应用[D];汕头大学;2011年
8 岳显可;棉属植物—锌结合蛋白(ZnBP)基因的克隆、表达及功能初探[D];成都中医药大学;2012年
9 钟耀刚;TGF-β1诱导下人肝星状细胞(HSCs)糖结合蛋白的研究[D];西北大学;2013年
10 陈晓红;小麦金属反应元件结合蛋白cDNA的筛选、克隆与分析[D];首都师范大学;2000年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026