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《河北师范大学》 2004年
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小麦糖原合成酶激酶(TaGSK1)的亚细胞定位及其功能鉴定

吴立柱  
【摘要】:本研究利用我室从小麦耐盐突变体RH8706-49中克隆的小麦糖原合成酶激酶基因(TaGSK1),在其C端标记绿色荧光蛋白基因(GFP)构建成双元表达载体pBIN-Ta-GFP,并以空载质粒pBINGFP_4为对照转化农杆菌GV3101,经筛选得到阳性农杆菌,采用浸花法转化Columbia型拟南芥,经卡那霉素筛选得到转基因拟南芥ATaGFP和AGFP。将二者的T2种子分别种植于含有卡那霉素的MS培养基上,6d后用confocal观察根部细胞,发现转融合基因TaGSA1-GFP的拟南芥植株(ATaGFP)的绿色荧光主要分布于细胞质内,而对照植株(AGFP)的绿色荧光主要分布于细胞核和细胞膜部位。 将转基因拟南芥ATaGFP和AGFP种子以及野生型Columbia型拟南芥Ac的种子种植于不同浓度的含盐培养基(70mmol/L NaCl,120mmol/L NaCl)上,7d后测量上述三类幼苗主根的生长量,在含盐70mmol/L NaCl的培养基上依次为8.509cm、6.722cm和1.493cm,经新复极差(SSR)测验转基因植株ATaGFP与AGFP之间差异极显著(p<0.01),ATaGFP与Ac之间差异显著(p<0.05);在含盐120mmol/L NaCl的培养基上三类种子的主根平均生长量依次为4.600cm、2.532cm和0.719cm,经新复极差测验转基因植株ATaGFP与AGFP之间,ATaGFP与Ac之间差异均极显著(p<0.01)。9d后统计各类植株的侧根生长数量,发现三者在含盐70mmol/L NaCl的培养基上依次为1.737、0.673和0.034条。在含盐120mmol/L NaCl的培养基上依次为0.976、0.289和0.000条,经差异显著性测定,在两种不同含盐量的培养基上,各类植株间侧根生长数量的差异均达到极显著水平(p<0.01)。说明小麦糖原合成酶激酶TaGSK1能够提高拟南芥的耐盐能力。同时利用confocal观察转基因植株ATaGFP的根部细胞,发现小麦糖原合成酶激酶(TaGSK1)在根尖分生组织和侧根的基部分布较多,这可能是转有目的基因的拟南芥主根生长量和侧根数量增加的内在原因之一。 将转基因拟南芥ATaGFP和AGFP种子分别种于MS培养基上,6d后用1.3mol/L蔗糖溶液处理二者幼苗的根部,经confocal观察,发现转融合基因TaGSK1-GFP的拟南芥植株(ATaGFP)根部细胞未发生质分离,而对照植株(AGFP)却发生了质壁分离。直至用2.0mol/L蔗糖溶液处理后部分细胞才发生质壁分离。说明小麦糖原合成酶激酶TaGSK1具有增强植物细胞抗胁迫、渗透的能力。
【学位授予单位】:河北师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S512.1

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【引证文献】
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