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《河北师范大学》 2009年
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稻瘟病菌钙/钙调素依赖蛋白激酶基因功能的研究

刘静  
【摘要】: 本实验室前期研究从稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)PO-41菌株中克隆到两个钙/钙调素依赖蛋白激酶(Ca~(2+)/Calmodulin-dependent protein kinase,CaMK)基因,分别命名为MgCaMK1和MgCaMK2。两个基因在基因组中为单拷贝基因。激酶活性实验表明:MgCaMK1为钙/钙调素依赖蛋白激酶,而MgCaMK2为钙依赖蛋白激酶(CDPK)。 本研究的主要目的是明确CaMK在稻瘟病菌菌丝生长及致病过程中的作用。主要结果如下: (1)分别构建了稻瘟病菌CaMK1和CaMK2基因敲除载体并进行了验证。 (2)利用PEG介导的转化系统将构建好的敲除载体转化到稻瘟病菌原生质体中。CaMK1基因共获得14个转化子。采用潮霉素抗性及PCR技术对转化子进行初筛,获得8个含抗潮霉素基因的转化子。Southern杂交验证表明,7个转化子为异位整合转化子,另一个转化子同源片段不仅没有替换掉目的基因也没有插入到该转化子的基因组DNA中。可能原因:一是PEG介导的转化系统同源重组效率较低,需大量筛选才能得到基因敲除突变子;二是CaMK1在基因组中为单拷贝基因,敲除可能是导致致死突变。对其中两个异位整合的转化子的生物学性状进行了分析。结果表明:转化子K1-1菌落颜色始终为米黄色,其平均生长速率要高于野生型,但是产孢量没有明显差异,孢子萌发时较野生型延迟,且萌发率很低,但24 h后观察有附着胞出现。转化子K1-2生物学性状与野生型无显著差异。 (3)构建了稻瘟病菌CaMK1基因RNAi载体。利用PEG介导的转化系统进行转化,目前已获得9个转化子。
【学位授予单位】:河北师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:S435.111.41

【参考文献】
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