收藏本站
《山西大学》 2007年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

八肋游仆虫绿色荧光蛋白(GFP)人工染色体的构建

王景涛  
【摘要】: 原生动物是区别于原核生物和高等真核生物的一个特定类群。它们作为一类单细胞真核生物,具有许多独特的特征,诸如,密码子使用的特殊性、单基因染色体结构和多核现象等,是分子细胞生物学研究的理想材料和模式生物。八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)是下毛目(Hypotrichida)游仆科(Euplotidae)的一个具有代表性的种。其具有一个无转录活性的生殖核(小核),负责有性生殖过程中遗传物质的传递;一个具转录活性的营养核(大核)负责细胞营养生长过程中基因的表达。 下毛类纤毛虫的大核染色体被称为“基因大小染色体(gene-size chromosome)”,其含有一个基因编码序列,5′和3′端各有一段基因表达调控序列以及端粒序列(C_4)_4(A_4)_3,是真核生物中结构最简约染色体。这一特征是研究染色体结构和功能的一个优势,是本研究构建纤毛虫人工染色体,分析基因功能的基础。 本研究首先克隆了八肋游仆虫的β_2-微管蛋白新基因(DQ864704),与β_1-微管蛋白基因相比,基因编码区(1335bp)的同源性达到99.1%。基因的非编码区(即上下游调控序列)的差异较大,但上游调控序列中均有一个TATAA盒,而且均富含AT。我们利用β_2-微管蛋白基因的上下游调控序列,构建纤毛虫大核人工染色体EUAMC,该染色体包括八肋游仆虫β_2-微管蛋白基因的上下游基因表达调控序列和端粒序列;动物绿色荧光质粒pEGFP-N_1(Clontech)的质粒元件-GFP基因、多克隆位点和抗生素基因(Kan~r)等。GFP基因将作为标记基因置于β_2-微管蛋白基因上下游调控序列之间。为了使GFP基因在八肋游仆虫中得到高效表达,用点突变的方法对该基因进行了密码子优化,便于原生动物细胞定位与基因功能的分析。用优化的脂质体转化方法将含有人工染色体的重组质粒pBTub-tel2转化到处于有性生殖分裂间期阶段的游仆虫细胞中,结果表明,GFP基因在游仆虫细胞中得以高效表达,36-48小时绿色荧光均匀分布在细胞核周围,逐渐扩散到整个细胞,染色体能够在大核中保持约90小时。
【学位授予单位】:山西大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q813.4

【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 生欣;腹毛类纤毛虫阔口游仆虫微管类细胞骨架及γ-微管蛋白的研究[D];华东师范大学;2011年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 薛启汉;绿色荧光蛋白(GFP)的特性及其在分子生物学研究中的应用[J];江苏农业学报;1999年01期
2 黄国存,朱生伟,董越梅,孙敬三;绿色荧光蛋白及其在植物研究中的应用[J];植物学通报;1998年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 和智君,汪旭;阿托品对中国仓鼠V79细胞有丝分裂过程的影响[J];癌变.畸变.突变;1999年03期
2 徐忠东,彭景中;线粒体与细胞凋亡[J];安徽教育学院学报;2001年06期
3 任亚红;端粒及端粒酶的研究[J];安徽教育学院学报;2004年06期
4 刘源霞;兰进好;杜景平;孙洪岩;;转基因玉米研究进展[J];山东农业科学;2007年06期
5 袁鹭;周传江;蒲德永;;Cu~(2+)胁迫诱导花鲢血细胞凋亡的研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年03期
6 康洁,余晓丽;植物细胞凋亡机理的研究[J];安徽农业科学;2005年08期
7 朱道圩;杨宵;理莎莎;符真珠;毛俊;;流式细胞仪在果树作物倍性鉴定上的应用[J];安徽农业科学;2006年24期
8 张丽霞;刘慧;;转基因生物安全性新探[J];安徽农业科学;2007年03期
9 张金谌;张学文;戴雄泽;;质粒拯救型T-DNA标签质粒的构建[J];安徽农业科学;2007年34期
10 黄永莲;黄真池;;大肠杆菌感受态细胞的少量制备方法及转化条件研究[J];安徽农业科学;2008年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吕金印;陆璃;高俊凤;;不同剂量~(60)Co辐照对小麦叶片保护酶活性的影响[A];中国科协2005年学术年会论文集——核科技、核应用、核经济论坛[C];2005年
2 周亚君;刘富中;陈钰辉;连勇;;抑制性差减杂交(SSH)技术在植物基因表达研究中的应用[A];中国茄子大会暨学术研讨会论文集[C];2008年
3 赵其波;高燕;蒋从军;;海岛棉抗病突变体HPFW356与原始材料新海16号的AFLP分析[A];中国棉花学会2009年年会论文汇编[C];2009年
4 杨筱珍;吴旭干;姚桂桂;成永旭;王春琳;;三疣梭子蟹第一次卵巢发育过程中卵母细胞和卵泡细胞超微结构的观察[A];2008年上海市动物学会学术会议论文集(一)[C];2008年
5 马勇杰;李红;许凯黎;古宏晨;;人肺腺癌细胞SPC-A-1与人正常肺WI-38对纳米颗粒吞噬作用的比较研究[A];上海市颗粒学会2005年年会论文集[C];2005年
6 潘景芝;许延铎;王琦;;玉竹内生真菌的分离鉴定及其化学成分的初步研究[A];第八届海峡两岸菌物学学术研讨会论文集[C];2007年
7 余杰;;中国蕈菌产品研究[A];首届中国蕈菌与健康高峰论坛论文集[C];2010年
8 张银花;李秋明;孙英健;;爱普里诺霉素对N2a细胞增殖的影响[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年
9 刘超;邱亚峰;马志永;;α-疱疹病毒与宿主细胞骨架相互作用的研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
10 张艳普;桑润滋;孙树春;田树军;;幼畜与成年畜超排卵发育潜能差异研究进展[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(下册)[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 白方方;哈维氏弧菌VHH溶血素对牙鲆组织细胞的侵染作用及诱导细胞凋亡作用研究[D];中国海洋大学;2010年
2 赵景霞;纳米氧化锌对海马神经元电生理特性的影响及对PC12细胞生物学效应的机制研究[D];南开大学;2010年
3 晏杰;Aurora B对Bacp/Nlp的磷酸化调控及其参与胞质分裂的机制研究[D];北京协和医学院;2009年
4 赵进慧;膜计算仿生优化算法及应用研究[D];浙江大学;2010年
5 马丹;温度敏感性PNIPAAm-g-PDMS智能表面的制备、性能研究及在细胞培养中的应用[D];浙江大学;2010年
6 王子成;DNA计算中的核酸序列设计及应用研究[D];华中科技大学;2009年
7 周思军;大豆抗虫基因转移及其转化系统优化研究[D];东北农业大学;2000年
8 陈庆山;大豆灰斑病种质资源遗传多样性的RAPD和SSR分析[D];东北农业大学;2001年
9 赵越;氮调控对甜菜(Beta Vulgaris.L)氮同化和蔗糖代谢关键酶的影响[D];湖南农业大学;2001年
10 詹亚光;白桦的组织培养和遗传转化研究[D];东北林业大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 潘媛;不同油菜品种硼吸收利用差异与细胞壁组分关系的研究[D];华中农业大学;2010年
2 姚秋林;水稻根特异表达启动子的克隆及功能分析[D];华中农业大学;2010年
3 杨兆光;棉花航天诱变芽黄突变体中棉所58Vsp的遗传及基因表达差异分析[D];华中农业大学;2010年
4 龚文芳;棉花抗细胞凋亡基因GhDAD1的克隆、定位及表达分析[D];华中农业大学;2010年
5 司武阳;磷脂酶A1产生菌的选育[D];安徽工程大学;2010年
6 廖甜甜;白细胞图像语义识别分类的研究[D];南昌航空大学;2010年
7 马月;家蚕凋亡相关基因BmICAD的表达及其功能研究[D];浙江理工大学;2010年
8 江艳;BmCycH基因及其在家蚕中表达特性的研究[D];浙江理工大学;2010年
9 侯萌萌;烟草茄尼醇合成途径中dxps基因的克隆与表达[D];郑州大学;2010年
10 饶杰;二维硅纳米模具的制作工艺研究[D];大连理工大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 顾福康,庞延斌,张作人;一种游仆虫无性分裂生殖的研究Ⅱ.无性分裂过程中皮层结构的形态发生[J];动物学报;1987年04期
2 顾福康,邹士法,李艺松,倪兵;镰游仆虫腹面皮层细胞骨架的扫描电镜观察[J];动物学报;2003年04期
3 娄慧玲;高巍;倪兵;顾福康;;魏氏拟尾柱虫腹皮层纤毛器微管胞器的形态及形态发生[J];动物学报;2007年04期
4 周素娟;尹飞;生欣;顾福康;;冠突伪尾柱虫的腹皮层纤毛器微管胞器及其形态发生[J];动物学报;2008年02期
5 何兰;曾红;沈洁;牛延宁;娄慧玲;顾福康;;FLUTAX法显示纤毛虫微管胞器的改良[J];动物学杂志;2006年03期
6 曾红;倪兵;顾福康;;原生动物贻贝棘尾虫微管胞器的荧光标记与显示[J];动物学杂志;2006年04期
7 赵柳;运迷霞;柳伟君;顾福康;;华美游仆虫细胞微管胞器的直接荧光和免疫荧光标记[J];动物学杂志;2008年03期
8 顾福康,张作人;阔口尖毛虫无性生殖和生理改组过程的比较[J];动物学研究;1992年04期
9 王梅,宋微波;卡龙游仆虫无性生殖期间的形态发生学研究(原生动物,纤毛虫)[J];动物学研究;1995年03期
10 朱慧,邹士法,李艺松,倪兵,顾福康;用非离子去垢剂抽提获得的小游仆虫皮层细胞骨架的构形[J];动物学研究;2004年05期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 曾红;腹毛目纤毛虫皮层微管类细胞骨架及微管蛋白的研究[D];华东师范大学;2006年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王莹;罗国坤;韩烈保;;结缕草胁迫诱导型启动子Rd29A的克隆及功能鉴定[J];生物技术通报;2011年08期
2 李大光;;多元的科学投资——克里格·文特尔获得经费的方法[J];科技导报;2011年19期
3 ;[J];;年期
4 ;[J];;年期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 沈明洪;杨坚;Raoul Heller;William Brown;;哺乳类人工染色体的构建[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
2 王伟;樊俊蝶;智慧;张志云;柴宝峰;梁爱华;;八肋游仆虫Rab蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达[A];中国动物学会原生动物学分会第十二次学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年
3 周俊初;史巧娟;马立新;谢波;;一个重组的绿色荧光蛋白K79R突变gfp基因的鉴定[A];第九届全国土壤微生物学术讨论会论文摘要[C];2001年
4 黄亮;熊婕;张恒;周剑峰;;利用人工染色体克隆建立间期核双色双融合FISH检测Ph染色体[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年
5 叶秀麟;徐是雄;王凌健;;利用GFP基因研究细胞骨架在植物活体细胞的新进展[A];中国植物学会七十周年年会论文摘要汇编(1933—2003)[C];2003年
6 柴宝峰;宋莉;郝婵娟;付月君;贺晓静;王伟;李毳;梁爱华;;八肋游仆虫两类肽链释放因子的相互作用[A];中国动物学会原生动物学分会第十二次学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年
7 宫琳;王志刚;冉海涛;凌智瑜;张群霞;;超声微泡造影剂介导小鼠骨骼肌基因转染实验研究[A];庆祝中国超声医学工程学会成立20周年——第八届全国超声医学学术会议论文汇编[C];2004年
8 张凌娣;王朝晖;李大伟;韩成贵;于嘉林;;BNYVV和RBSDV编码基因沉默抑制子的初步研究[A];中国植物病理学会2004年学术年会论文集[C];2004年
9 曾溢滔;;发展动物生物反应器产业[A];中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会论文摘要集[C];2006年
10 沈玮玮;宋成丽;陈洁;付亚萍;吴建利;江绍玫;;用克隆池PCR法筛选菰基因组TAC文库获得抗病基因候选克隆[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会论文摘要汇编[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 中国科学院生物学家 于军;从文特尔的实验说开去[N];人民日报;2007年
2 邰举;韩国培育出能发光的鸡[N];农民日报;2004年
3 新讯;美科学家要造人工基因[N];医药经济报;2006年
4 邰举;韩国“孵”出能发光的鸡[N];科技日报;2004年
5 本报记者 许琦敏;他总是见人所未见[N];文汇报;2010年
6 由戏添;华农克隆水果打入西方市场[N];农民日报;2002年
7 潘治;德培育出转基因绿色猪[N];人民日报;2003年
8 记者 潘治;德国:培育出转基因绿色猪[N];新华每日电讯;2003年
9 冯卫东;人工设计能否替代自然选择?[N];科技日报;2009年
10 张中桥;可诱导性真核表达载体构建成功[N];中国医药报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 贺晓静;八肋游仆虫中心蛋白的研究[D];山西大学;2005年
2 宋莉;游仆虫第二类肽链释放因子C端功能区解析[D];山西大学;2007年
3 付莉莉;棉花原生质体“供—受体”融合及遗传转化研究[D];华中农业大学;2009年
4 申宝忠;GFP基因标记的移植瘤活体分子成像研究[D];天津医科大学;2004年
5 张昕;植物病原拮抗细菌的发酵条件作用机制及定殖规律的研究[D];浙江大学;2005年
6 马欣荣;根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的多年生黑麦草(Lolium perenne L.)遗传转化[D];四川大学;2006年
7 秦学斌;中国人基因组粘粒文库的构建FRAXA位点28个新STS的分离和粘粒次级重叠群的构建[D];中国协和医科大学;1996年
8 张凌娣;同源序列高剂量异常表达及病毒编码蛋白对基因沉默的作用[D];中国农业大学;2004年
9 金双侠;棉花遗传转化体系的优化及突变体的创制[D];华中农业大学;2006年
10 周振明;采用转染血液循环期原始生殖细胞方法和鸡—兔异种动物核移植方法制备转基因鸡[D];中国农业大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王景涛;八肋游仆虫绿色荧光蛋白(GFP)人工染色体的构建[D];山西大学;2007年
2 赵亚琴;定点突变对八肋游仆虫中心蛋白功能及性质的影响[D];山西大学;2004年
3 丰九英;八肋游仆虫中心蛋白的表达、纯化及光谱性质研究[D];山西大学;2003年
4 樊俊蝶;八肋游仆虫rab基因的克隆与表达[D];山西大学;2004年
5 孙砚;利用拟南芥遗传资源构建植物人工染色体[D];华中农业大学;2003年
6 张志云;八肋游仆虫信息素在大肠杆菌中的表达、纯化及其活性测定[D];山西大学;2003年
7 智慧;游仆虫囊泡转运相关蛋白Rab-GTPase的基因克隆及功能分析[D];山西大学;2005年
8 李凌燕;八肋游仆虫Rab家族新成员Eo-rab-1N基因的克隆、表达及蛋白纯化[D];山西大学;2006年
9 聂宇;八肋游仆虫Rab家族基因的多样性及一种非典型Rab蛋白的功能分析[D];山西大学;2008年
10 许静;游仆虫中GARP基因的克隆、表达及光谱分析[D];山西大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026