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《山西农业大学》 2017年
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黑果枸杞花色苷和原花青素生物合成关键酶基因的克隆和表达分析

杨锋  
【摘要】:黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)为茄科(Solanaceae)枸杞属(Lycium L.)多年生灌木,主要分布于我国西北地区。其成熟的果实中富含花色苷和原花青素等多种具有抗氧化活性的有效成分,为少数民族常用药。但目前对黑果枸杞活性成分的生物合成途径研究较少,有关生长过程中有效成分的积累与动态变化规律尚不明确。鉴于此,本研究以不同生长时期的黑果枸杞果实为研究材料,采用PCR克隆获得了控制花色苷及原花青素生物合成的关键酶基因,一方面从化学成分含量和关键酶基因的表达量来研究活性成分的积累与动态变化规律,寻找有效成分的最大积累期,进而确定黑果枸杞浆果的最佳采收期;另一方面将关键酶基因构建到病毒诱导的瞬时表达载体上,并观察异源表达此类基因的烟草中有效成分变化情况。主要实验结果如下:1.利用高保真酶扩增获得控制黑果枸杞果实中花色苷和原花青素合成的关键酶基因—LrDFR、LrANS、LrLAR和LrANR,其序列全长分别为1140、1251、1002和1017 bp,经预测发现其分别编码大小为379、416、333和338 aa的蛋白质,均具有相应蛋白家族的特征位点及结构域,且与茄科的番茄、马铃薯及烟草等具有较近亲缘关系;2.结合超声波辅助提取和紫外分光光度法比较分析4个不同生长时期黑果枸杞中花色苷与原花青素的含量变化,发现果实中花色苷的含量会随其生长发育不断增长,且在Stage 4时含量达到最高,为6.08 mg/g DW;而原花青素的含量积累规律是先增加,成熟后稍降低,最高含量期在Stage 3,约为22 mg/g DW;3.应用qRT-PCR技术对4个时期下的LrDFR、LrANS、LrLAR和LrANR进行定量分析。发现LrDFR和LrANS表达量随果实的成熟变色不断上升;而LrLAR和LrANR的表达水平均是先上升后下降。而且在果实生长前期,原花青素主要是通过LAR途径进行合成,而后期主要是由ANR催化合成;4.通过双酶切(Cla Ⅰ和SaⅠ)将LrANS、LrLAR和LrANR构建到马铃薯X病毒载体上—pGR107,利用农杆菌介导将重组质粒转入烟草中,进行瞬时表达。结果显示导入重组质粒LrANS-pGR107的烟草叶片中的花色苷与原花青素含量均增加,而导入LrLAR-pGR107或LrANR-pGR107的烟草叶片中只有原花青素的含量增加,而花色苷却同空白对照一样,含量太低无法测定,进一步验证了 LrANS、LrLAR以及LrANR的基因在花色苷以及原花青素合成途径中的关键功能。
【学位授予单位】:山西农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S567.19

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 何文革;那松曹克图;吾其尔;吴春焕;赵洁;王瑛;李玉霞;;新疆焉耆盆地黑果枸杞自然分布特点及其生物特性[J];中国野生植物资源;2015年04期
2 段雅彬;姚星辰;朱俊博;张娟玲;李向阳;;藏药黑果枸杞中总花色苷与原花青素B_2的含量测定[J];时珍国医国药;2015年07期
3 何文革;那松曹克图;吾其尔;吴春焕;李玉霞;;新疆焉耆盆地黑果枸杞灌丛与根系组成及分布特征[J];草业科学;2015年07期
4 徐金楠;刘玮;刘春晶;柴银;高向东;姚文兵;;不同枸杞中多糖含量与结构特征的对比研究[J];中国食品学报;2015年04期
5 谭亮;董琦;曹静亚;耿丹丹;胡风祖;;黑果枸杞中花色苷的提取与结构鉴定[J];天然产物研究与开发;2014年11期
6 任小娜;陈志梅;曾俊;郭丽君;王玉涛;;黑果枸杞中原花青素提取条件的优化与含量测定[J];食品与发酵工业;2015年01期
7 闫亚美;代彦满;冉林武;曹有龙;罗青;李晓莺;秦垦;戴国礼;曾晓雄;;黑果枸杞与5种果蔬中花色苷组成及体外抗氧化活性比较[J];食品工业科技;2014年16期
8 彭飞;黄翠华;尤全刚;高天鹏;;种植黑果枸杞(Lycium ruthenicum)对盐渍土盐分分布的影响[J];中国沙漠;2013年05期
9 孙楠;杜连平;孙跃宁;王海英;;黑果枸杞、枸杞、黑加仑中原花青素含量对比研究[J];食品与药品;2013年04期
10 林丽;李进;李永洁;冯燕;;黑果枸杞花色苷对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用[J];中国药学杂志;2013年08期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 王龙强;盐生药用植物黑果枸杞耐盐生理生态机制研究[D];甘肃农业大学;2011年
2 胡可;花青素苷合成途径中结构基因的表达对菊花和瓜叶菊花色的影响[D];北京林业大学;2010年
3 祝钦泷;彩叶草(Solenostemon scutellarioides)叶色形成相关的花色素苷生物合成途径的分子调控研究[D];西南大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
1 段雅彬;黑果枸杞对辐射损伤小鼠的保护作用及机制研究[D];青海大学;2016年
2 伊秀娟;基于转录组测序的石斛黄酮类化合物生物合成相关基因的克隆与表达分析[D];上海师范大学;2016年
3 楼舒婷;黑果枸杞的活性成分和挥发性组分研究[D];浙江大学;2015年
4 赵丹;酒体系中原花青素的聚合转化及其性质的研究[D];华南理工大学;2013年
5 唐亚萍;天山雪莲花青素生物合成关键酶基因的克隆及功能鉴定[D];新疆师范大学;2012年
6 宋加贵;小麦蓝矮病植原体tengu基因的分离及致病性测定[D];西北农林科技大学;2011年
【共引文献】
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1 汪可馨;;黑果枸杞的特性、栽培技术及应用概述[J];青海农技推广;2015年04期
2 刘凤兰;王建友;韩宏伟;毛金梅;王琴;李勇;;不同处理方法对“黑杞1号”枸杞几种功能性成分的影响[J];北方园艺;2015年21期
3 李捷;冯丽丹;王有科;何静;陈秀蓉;;尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)侵染对枸杞光合和荧光参数的影响[J];中国沙漠;2015年06期
4 李永慧;孙朝辉;山永凯;杨全余;李永芳;;黑果枸杞口服液对正常小鼠体内抗氧化活性的影响[J];中成药;2015年08期
5 伍玉辉;罗俊;;黑果枸杞色素药理作用研究进展[J];中国民族民间医药;2015年13期
6 杨小青;宋金春;谢顺岚;郝好华;;不同提取方法莲子心总生物碱抗氧化活性比较[J];中国医药导报;2015年18期
7 夏园园;莫仁楠;曲玮;柳文媛;;黑果枸杞化学成分研究进展[J];药学进展;2015年05期
8 谈永萍;魏智清;;黑果枸杞水浸液对中华鳑鲏及草金鱼抗缺氧能力的影响[J];产业与科技论坛;2015年09期
9 徐金楠;刘玮;刘春晶;柴银;高向东;姚文兵;;不同枸杞中多糖含量与结构特征的对比研究[J];中国食品学报;2015年04期
10 王超;蒋宝平;龙军;俞云;喻斌;沈祥春;许立;;黑果枸杞对急性酒精性肝损伤的保护及其抗氧化作用的影响[J];中药新药与临床药理;2015年02期
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1 袁媛;郁金香花色苷合成基因的克隆及其表达差异与花色变化的关系[D];上海交通大学;2015年
2 付建新;短日照诱导甘菊成花转变的分子机理[D];北京林业大学;2014年
3 张超;葡萄糖调控牡丹切花花青素苷合成的分子机理[D];北京林业大学;2014年
4 陆嘉惠;三种药用甘草耐盐性及耐盐机制研究[D];石河子大学;2014年
5 金雪花;基于高通量测序的瓜叶菊花青素苷合成途径研究[D];北京林业大学;2013年
6 孙翊;瓜叶菊PCFH基因对花青素苷合成及花色的影响[D];北京林业大学;2011年
7 侯召华;黑米花色苷的制备及其对大鼠慢性酒精肝损伤保护作用的研究[D];中国农业科学院;2010年
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1 杨冬彦;黑果枸杞速溶粉的制备及其品质评价[D];中国科学院大学(中国科学院过程工程研究所);2018年
2 刘力源;矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的辐射防护作用及机制研究[D];哈尔滨工业大学;2018年
3 王倩怡;基于大肠杆菌细胞膜特性研究丁香酚协同脉冲电场的灭菌机制[D];华南理工大学;2018年
4 许志诚;黑枸杞叶茶提取物抗氧化活性及调节血脂机制研究[D];扬州大学;2018年
5 吴佳豫;黑果枸杞繁殖生物学研究[D];甘肃农业大学;2018年
6 陈遇嘉;小麦蓝矮植原体SWP6蛋白抑制本氏烟坏死功能的研究[D];西北农林科技大学;2018年
7 乔一杰;X射线辐射对盐酸伊立替康的药代动力学影响研究[D];青海大学;2018年
8 陶丛敏;青海黑果枸杞原花青素对小鼠光老化皮肤的保护作用[D];青海大学;2018年
9 罗文娟;黑果枸杞原花青素对小鼠衰老皮肤抗氧化作用及凋亡相关蛋白的影响[D];青海大学;2018年
10 王雪辉;乙醛诱导黄烷醇花色苷的缩合反应对葡萄酒涩感的影响[D];陕西师范大学;2018年
【二级参考文献】
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1 赵辰砚;王淼;张冠文;赵春杰;;RP-HPLC法测定葡萄籽提取物中原花青素B_1和B_2的含量[J];沈阳药科大学学报;2014年01期
2 林丽;张裴斯;晋玲;贺正阳;高素芳;;黑果枸杞的研究进展[J];中国药房;2013年47期
3 孙楠;杜连平;孙跃宁;王海英;;黑果枸杞、枸杞、黑加仑中原花青素含量对比研究[J];食品与药品;2013年04期
4 付京晶;周华坤;赵新全;陈哲;温军;姚步青;杨元武;金艳霞;;草原克隆植物对光、温、水、肥和牧压变化梯度的响应[J];草业科学;2013年04期
5 戴国礼;秦垦;曹有龙;焦恩宁;张波;;黑果枸杞的花部结构及繁育系统特征[J];广西植物;2013年01期
6 闫亚美;冉林武;曹有龙;秦垦;安巍;曾晓雄;;黑果枸杞花色苷含量测定方法研究[J];食品工业;2012年06期
7 赵新风;王炜;张涛;白元;徐海量;;塔里木河下游地区滴灌沙枣防护林地土壤盐分分布特征[J];中国沙漠;2012年03期
8 王建明;李早慧;;高效液相法测定视力健咀嚼片中原花青素的含量[J];中国医药导刊;2012年01期
9 季梅;李强;娄红祥;;高效液相色谱-质谱检测红葡萄皮中花色苷[J];药物分析杂志;2011年12期
10 张妍;吴秀香;;原花青素研究进展[J];中药药理与临床;2011年06期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 白新祥;菊花花色形成的表型分析[D];北京林业大学;2007年
2 王淑芬;心里美萝卜色素合成规律研究及萝卜花青素调节基因的克隆[D];山东农业大学;2006年
3 孟丽;蓝色花形成关键基因的分离及其表达分析[D];北京林业大学;2006年
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1 董智哲;香草兰挥发性成分鉴定及提取研究[D];华中农业大学;2014年
2 胡凤;不同植物果实中原花青素的提取及高效液相色谱分析[D];东北师范大学;2014年
3 方芳;紫色马铃薯花色苷提取物体外抗前列腺癌研究[D];浙江大学;2014年
4 宋超;黄芪提取物抗辐射损伤及抗氧化作用的实验研究[D];山东大学;2013年
5 石彩娟;铁皮石斛NAC基因的遗传转化[D];西南交通大学;2013年
6 姚瑶;石斛苯丙氨酸解氨酶基因的克隆及表达分析[D];安徽农业大学;2013年
7 陈奕冰;葛花多糖对辐射损伤小鼠保护作用的研究[D];吉林大学;2013年
8 吕晓鹏;黑果枸杞多糖的分离纯化与结构表征研究[D];西北大学;2012年
9 张珏;小麦蓝矮病植原体β-1,4-内切葡聚糖酶基因的分离、序列分析与致病性测定[D];西北农林科技大学;2010年
10 徐茜;低强度微波对电离辐射造血损伤的拮抗作用及其机理研究[D];苏州大学;2010年
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9 石志刚;王亚军;安巍;梁晓婕;张曦燕;;黑果枸杞的栽培技术及生产特性分析[J];湖北农业科学;2016年19期
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5 孙丽丽;高万;张孟孟;利程;王爱国;苏亚伦;吉腾飞;;黑果枸杞果实花色苷标准品的制备研究[A];中国化学会第十届全国天然有机化学学术会议论文集——第三分会场:天然产物合成生物学、化学生物学及新技术[C];2014年
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8 刘冰冰;郑棋月;和磊;黄漫青;张楠;孔玲;高珊;鲜波;李国君;任建武;;线虫模式生物的应用研究——黑果枸杞原花青素延长寿命的功效及其机制[A];2017年第十五届中国北方实验动物科技年会论文集[C];2017年
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1 实习生 强欣;我市黑果枸杞产业发展迎来“春天”[N];吴忠日报;2014年
2 记者 家林;利通区将建成全国最大的黑果枸杞之乡[N];吴忠日报;2014年
3 本报记者 李鲲鹏 周志翔;天价黑果枸杞宁夏培育成功[N];银川晚报;2014年
4 张俊卿;格尔木市政协建言助推野生黑果枸杞得保护[N];人民政协报;2013年
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6 李树志;我省黑果枸杞深加工有了新成果[N];青海日报;2013年
7 本报记者 张瑛;解密黑果枸杞:科学种植 回归理性[N];宁夏日报;2015年
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9 ;柴达木科技创新又传捷报[N];柴达木日报;2014年
10 本报记者 陈丽娜;追求着就是美丽的[N];中国教育报;2012年
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1 闫亚美;黑果枸杞多酚的组成、抗氧化活性及指纹图谱研究[D];南京农业大学;2014年
2 刘洋;黑果枸杞叶多糖的分离纯化、分析鉴定及生物活性研究[D];西北大学;2016年
3 陈轶;黑果枸杞和白刺的抗焦虑作用及机制探讨[D];北京中医药大学;2017年
4 王龙强;盐生药用植物黑果枸杞耐盐生理生态机制研究[D];甘肃农业大学;2011年
5 金红利;藏药黑果枸杞化学成分的系统分离纯化与表征[D];大连理工大学;2015年
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1 虎娟;黑果枸杞和马蔺花青素生物合成关键基因的克隆和功能解析[D];宁夏大学;2018年
2 严莉;黑果枸杞MYB转录因子的识别及LrMYB1的功能研究[D];宁夏大学;2018年
3 吴芳明;盐胁迫下黑果枸杞幼苗组织肉质化发生与转录组分析[D];西北农林科技大学;2018年
4 曹茸茸;黑果枸杞抗运动疲劳作用研究[D];甘肃中医药大学;2018年
5 杨冬彦;黑果枸杞速溶粉的制备及其品质评价[D];中国科学院大学(中国科学院过程工程研究所);2018年
6 李娜;运动联合黑果枸杞黄酮干预对抑郁症TOLL样受体通路信号因子表达的影响[D];湖南师范大学;2018年
7 杨锋;黑果枸杞花色苷和原花青素生物合成关键酶基因的克隆和表达分析[D];山西农业大学;2017年
8 王瑞娟;黑果枸杞种苗繁育技术及分级移栽研究[D];甘肃农业大学;2017年
9 孙慧娟;基于抗氧化活性及化学成分评价的黑果枸杞冻干赋形制剂工艺的研究[D];北京中医药大学;2018年
10 王爱敏;灌水量对黑果枸杞产量、品质及功效的影响[D];甘肃农业大学;2018年
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