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《山西农业大学》 2003年
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干旱诱导杨树cDNA文库的构建及DDRT-PCR制备筛选文库的探针的研究

贾志平  
【摘要】: 改善和提高植物的抗旱性研究是植物抗逆性研究的重要内容。随着分子生物学技术的发展,通过基因工程改良植物的抗旱能力被广大科研工作者认为是一种快捷,有效的方法。作为基因工程的上游技术-基因克隆在上世纪九十年代后得到迅速发展,本文对近年来植物基因克隆新技术,新方法进行简要的综述,重点对差异显示技术(DDRT-PCR)进行了阐述。本研究以小叶杨(Popμlus simonii)为实验材料,构建了干旱诱导小叶杨的cDNA文库。并通过差异显示技术获取筛选cDNA文库的探针,取得如下研究结果:用ZAP噬菌体为载体系统,建成了原始库容为2×10~5pfu/ml的干旱处理样品库和0.8×10~5pfu/ml的对照库。经文库扩增后,干旱处理样品库增加为2.0×10~(10)pfu/ml,对照库增加为1.2×10~8pfu/ml。通过银染法展示DDRT-PCR结果,干旱处理样和对照样共有近5000余条带显现,干旱处理样与对照样之间有较大差异,共挑取差异带35条。对差异带回收、二次扩增后直接测序,通过EST BLAST进行比对,找到与抗旱相关的cDNA片段。本研究还对聚丙烯酰胺凝胶电泳条带的回收做了一定的改良,取得了很好的回收结果。为下一步文库筛选、基因的获得做了必要的准备。
【学位授予单位】:山西农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S792.11

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 刘中成;枣总RNA提取及mRNA差异显示技术体系的建立[D];河北农业大学;2005年
2 邱玲俐;猪繁殖与呼吸综合征病毒的RNA多态性研究[D];福建农林大学;2010年
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【参考文献】
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【共引文献】
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10 曾磊;杜氏盐藻叶绿体双筛选载体pchlN-CAT-BAR的构建及转化[D];郑州大学;2010年
【同被引文献】
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1 康文霞;张兆远;王慧;张沅;;蛋鸡及其正反杂交组合卵巢组织的基因差异显示研究[J];山东大学学报(理学版);2006年02期
2 李春波,高锋,钟永旺,魏春红,李毅;烟草果胶甲基酯酶 (PME)基因的克隆及功能分析(英文)[J];生物化学与生物物理进展;2004年07期
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8 李宏;植物组织RNA提取的难点及对策[J];生物技术通报;1999年01期
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10 叶华;马力;高秀容;;果胶酯酶的研究进展[J];生物学杂志;2005年06期
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1 闫红飞;小麦叶锈菌与Lr38互作诱导抗病基因表达DDRT-PCR分析[D];河北农业大学;2003年
2 耿雪青;苹果果实cDNA文库的构建[D];中国农业大学;2003年
【二级引证文献】
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1 薛渝峰;赵锦;刘孟军;;cDNA—AFLP技术及其在干果研究中的应用[A];第五届全国干果生产、科研进展学术研讨会论文集[C];2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前8条
1 赵彦檩;枣谷胱甘肽转移酶的克隆、表达及其与枣疯病相关性研究[D];河北农业大学;2011年
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3 王洋;枣烘焙香气成分的GC-MS分析与质量评价[D];河北农业大学;2012年
4 韩斌;枣果实总RNA的提取及其反转录技术体系的建立[D];河北农业大学;2006年
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6 李建超;抗枣疯病基因的差异表达研究[D];河北农业大学;2006年
7 吕莲;奶牛妊娠早期血液中PAG及相关基因表达的研究[D];扬州大学;2009年
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【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 崔大祥,闫小君,苏成芝;mRNA差异展示PCR的进展[J];生命的化学(中国生物化学会通讯);1997年04期
【相似文献】
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3 胡超;欧美黑杨与小叶杨杂交后代性状分析及胚培养研究[D];华中农业大学;2011年
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5 李旭冉;美洲黑杨×小叶杨遗传连锁图谱构建[D];南京林业大学;2012年
6 王建义;小叶杨抗逆相关基因的克隆及单核苷酸多态性分析[D];内蒙古农业大学;2008年
7 张海英;mRNA差异显示分离水稻抗稻瘟病基因的相关cDNA片段[D];四川农业大学;2003年
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