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《山西农业大学》 2005年
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猪O型口蹄疫病毒VP_1基因的原核表达及重组蛋白的反应原性检测

杜宇  
【摘要】:口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)引起偶蹄动物的一种传染病,它严重危害家畜的生产力和畜产品质量,给畜牧业生产和进出口贸易造成较大的经济损失,直接威胁着国际贸易和国家声誉及人类食品卫生,因而受到人们的普遍关注。口蹄疫病毒衣壳由VP_1、VP_2、VP_3、VP_4 4种结构蛋白各60个拷贝组成,其中VP_1蛋白又称1D蛋白,其基因位于基因组的2977-3615位,编码213个氨基酸,VP_1暴露在病毒颗粒的表面,是诱导产生中和抗体的主要成分。 本研究以猪O型FMDV TL-69代毒株为研究对象,参考已发表的VP_1基因序列,设计和合成一对引物V_1和V_2,通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增得到FMDV VP_1约600bp的目的基因,将VP_1基因和pET30a+分别用相同的限制性内切酶BamH Ⅰ/Hind Ⅲ双酶切后,用T_4DNA酶连接后转到宿主菌TG1中,筛选出阳性PETVP_1重组质粒。经测序表明,VP_1基因定向克隆到表达载体pET30a+中。将VP_1基因与Genkank发表的序列进行同源性比较,证明本研究所用毒株与taiwan和chupei taiwan(NCBI登陆号分别为NC004004、AF026168)同源性最高,可达98%。将PETVP_1重组质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)plays,确定诱导时间和IPTG诱导剂量,结果表明以终浓度为1.0mmol/L的IPTG诱导4h将重组菌处理后进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),可观察到含量高且明显可见的条带,说明结构蛋白VP_1基因在大肠杆菌中能高效表达,且表达的融合蛋白分子量约为35KD,与预期蛋白大小一致。经超声波裂解菌体取沉淀和上清经SDS-PAGE电泳证明表达蛋白以包涵体形式存在,表达的重组蛋白N端具有六个纽氨酸(His)标签,经变性、纯化、复性,进行蛋白印迹(Western-blot)分析和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,该融合蛋白能被口蹄疫病毒阳性血清所识别,具有良好的反应原性。为进一步研制FMD VP_1基因工程疫苗和FMD诊断试剂盒奠定基础。
【学位授予单位】:山西农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S852.65

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 张显升,刘在新,赵启祖,谢庆阁;口蹄疫病毒基因组RNA结构与功能研究进展[J];病毒学报;2001年04期
2 张洪英,郭瀛军,陈祖欢,林懿,孙树汉;口蹄疫病毒融合表位基因在原核及真核表达系统中的正确表达[J];第二军医大学学报;2002年11期
3 李云峰,达来,孙薛蔚,谢秀杰,江晓勇;口蹄疫病毒抗原表位的编码序列在大肠杆菌中表达[J];内蒙古大学学报(自然科学版);2002年03期
4 沈小燕,丛国正,常惠芸,王建华,谢庆阁;口蹄疫病毒的抗原变异与逃避免疫反应[J];中国兽医科技;2004年12期
5 柳纪省;口蹄疫研究进展[J];中国兽医科技;1999年03期
6 尤永进,葛艳,陈波,饶忠,徐泉兴,朱彩珠,张强,卢永干;口蹄疫病毒非结构蛋白3B真核表达载体的构建及表达[J];中国预防兽医学报;2003年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 连京华,秦卓明,黄波;鸡传染性支气管炎研究进展[J];山东农业科学;2000年01期
2 钱凤芹,刘长梅,任红梅,李爱芹,庄文忠;鸡新城疫病毒山东分离株F蛋白基因的克隆与鉴定[J];山东农业科学;2001年03期
3 东野传现;史玉颖;黄中利;刘玉山;亓丽红;傅剑;;“禽喘康颗粒冲剂”对鸡人工感染新城疫病毒临床效果的研究[J];山东农业科学;2007年02期
4 李子剑;李云龙;陈苏;艾武;宋敏训;李玉峰;;鸭肠炎病毒US2基因的序列测定与分析[J];山东农业科学;2008年03期
5 李祥辉;黄大鹏;黄玉兰;;鸡抗小鹅瘟病毒IgY提取方法的比较试验[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年23期
6 张小飞,潘孝成,汪秀娟,赵瑞宏,蒋书东;绩溪县浩寨兔病毒性出血症的诊断[J];安徽农业科学;2002年02期
7 沈咏舟,沈乐平,程建整;鸡传染性法氏囊病病毒冻干保护剂热稳定性研究[J];安徽农业科学;2004年01期
8 沈咏舟,沈乐平,程建整;鸡新城疫病毒耐热冻干保护剂的研究[J];安徽农业科学;2004年02期
9 赵坤,张慧辉,郭东升;猪繁殖和呼吸综合征组织灭活苗的研制[J];安徽农业科学;2005年07期
10 王乐义,马洪;自制和进口试剂盒检测鸡传染性支气管炎抗体的比较研究[J];安徽农业科学;2005年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 曾政;任远志;叶昭辉;凌洪权;杨泽林;熊仲良;;重庆市2009年犬狂犬病检测及流行病学调查[A];重庆微生物学会第九届会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2009年
2 薛传华;何林;赵志模;;朱砂叶螨β-actin基因cDNA片段的克隆及实时荧光定量PCR方法的建立[A];庆祝重庆市植物保护学会成立10周年暨植保科技论坛论文集[C];2007年
3 孔繁德;王荣;陈琼;吴德峰;徐淑菲;;多重RT-PCR一步法技术同时检测猪瘟病毒和蓝耳病病毒方法的建立以及初步应用[A];第十届中国科协年会论文集(三)[C];2008年
4 邵西群;闫喜军;;貉源狂犬病病毒NeiMeng株的分离与鉴定[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
5 崔保安;魏战勇;;猪细小病毒vaccine株VP2基因克隆与抗原性分析[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
6 韩勇;李文刚;;应用多重PCR方法检测猪伪狂犬病毒细小病毒和圆环病毒[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
7 郑玉姝;赵朴;王宪文;姚四新;刘兴友;;鸡培养细胞γ-干扰素的诱生[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
8 刘运超;陈玉梅;王爱萍;张改平;鲁琨;李乔木;王秋霞;;用RT-PCR技术快速检测猪瘟病毒[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
9 李雪华;崔金忠;江倩;王林;刘兴友;;鸡生长与免疫抑制综合征病毒检测方法研究[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
10 张晓根;郑鸣;任敏;;胶体金免疫层析法检测猪PRV gE抗体方法的建立及应用[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
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1 赵冬敏;B亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D];山东农业大学;2010年
2 赵鹏;猪繁殖与呼吸综合征病毒在抗体选择压下的变异[D];山东农业大学;2010年
3 刘栋;畜禽补体C3d基因克隆及序列分析和重组鸡C3d免疫佐剂效果研究[D];山东农业大学;2010年
4 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
5 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
6 张琪;KLT对中脑神经系统疾病的影响及KLT、NDV、SW联合抗肿瘤作用机制研究[D];西北农林科技大学;2010年
7 姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
8 郭银汉;福州地区对虾病毒病的病原诊断及流行病学[D];福建农林大学;2000年
9 程坚;表达和共表达H9亚型禽流感病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒[D];扬州大学;2001年
10 王凤阳;重组逆转录病毒-精原干细胞介导的转基因研究[D];中国人民解放军军需大学;2001年
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1 许媛媛;鸭瘟的动态病理学研究和鸭CD4的克隆[D];华中农业大学;2010年
2 李爽;鸭源禽呼肠孤病毒感染雏鸭的免疫病理学研究[D];华中农业大学;2010年
3 徐珊珊;重组杆状病毒介导的高致病性猪繁殖与呼吸综合征基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2010年
4 胡智斌;湖北省高致病性猪蓝耳病活疫苗(JXA1-R株)试用报告[D];华中农业大学;2010年
5 许莹;H3N8型马流感血凝素核酸疫苗的初步研究[D];南京医科大学;2010年
6 邬成业;禽流感病毒H5N1亚型河南分离株NP基因的原核表达及T细胞表位筛选[D];郑州大学;2010年
7 史平玲;猪FcγRⅢ介导PRRSV抗体依赖增强作用研究[D];郑州大学;2010年
8 巩艳艳;抗体免疫选择压作用下新城疫病毒HN基因和F基因的变异[D];山东农业大学;2010年
9 裴兰英;HSP_(70)与MDV肿瘤的发生发展相关性研究[D];山东农业大学;2010年
10 薛梅;潍坊地区猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查[D];山东农业大学;2010年
【二级参考文献】
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1 刘在新,赵启祖,刘卫,周鹏程,朱彩珠,常慧芸,谢庆阁;6株A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1(1D)基因的核苷酸序列分析[J];病毒学报;1998年01期
2 袁清安,王国力,俞炜源,黄翠芬;小鼠单克隆抗体HAb25可变区的人源化计算机辅助设计[J];军事医学科学院院刊;1999年01期
3 ;Design and preparation of cloned DNA fragment from pac gene of Streptococcus mutans[J];口腔医学纵横;2000年01期
4 贾战生,周永兴,连建奇,冯志华,李谨革,李光玉,张文彬;抗丙型肝炎病毒锤头结构核酶的计算机设计和载体的构建[J];中华肝脏病杂志;1999年S1期
5 江鹏斐,赵启祖,谢庆阁;口蹄疫研究进展[J];中国农业科学;1999年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 廖德芳;李华春;;口蹄疫病毒结构蛋白P1研究进展[J];动物医学进展;2007年S1期
2 刘光清,倪征,云涛,梁华丽,华炯刚,李双茂,杜清云;猪圆环病毒II型结构蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位预测[J];中国预防兽医学报;2005年06期
3 杨彬,刘在新,胡永浩,谢庆阁;口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达[J];中国兽医科技;2003年03期
4 葛淑敏,金宁一,尹革芬,郑敏,王振国,马鸣潇;6株O型口蹄疫病毒结构蛋白vp1基因的克隆与序列分析[J];中国病毒学;2004年03期
5 刘靖清;王君;周兵;李凯;;口蹄疫病毒(OS/99株)VP1蛋白的空间构型和其可能抗原位点的初步分析[J];中国农学通报;2010年08期
6 潘丽;张永光;王永录;方玉珍;蒋守田;王宝琴;王文秀;王炜;孙元;吕建亮;谢庆阁;;口蹄疫病毒VP1基因在转基因拟南芥种子中的表达及活性检测[J];畜牧兽医学报;2006年05期
7 任林柱;王兴龙;段小宇;梅英武;刘锴;王学理;;口蹄疫病毒YN株VPl-2A基因的克隆及遗传变异分析[J];吉林农业大学学报;2006年04期
8 杜进鑫;王永录;;口蹄疫疫苗研究新进展[J];生物技术通报;2009年03期
9 周建华;丛国正;高闪电;常惠芸;;FMDV OA/58病毒株VP3蛋白结构的模拟与分析[J];华北农学报;2008年06期
10 张中旺;张永光;王永录;潘丽;张昱;;Asia1型口蹄疫病毒分离株P1基因的原核表达及其多克隆抗体的制备[J];中国人兽共患病学报;2009年10期
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1 李雅静;林祥梅;吴绍强;;南非Ⅱ型口蹄疫病毒抗原表位的筛选及抗原性检测[A];中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2008年
2 李夏莹;王建昌;郑世军;;口蹄疫病毒VP1,2C蛋白与宿主细胞相互作用机制的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
3 杨鑫;王红宁;周英顺;高荣;曾博;徐昌文;丁梦蝶;;猪源O型口蹄疫病毒分离株VP1基因特征分析[A];四川省动物学会第九次会员代表大会暨第十届学术研讨会论文集[C];2011年
4 郑敏;金宁一;张洪勇;刘棋;韦婷;郭建刚;李华明;尹革芬;鲁会军;;口蹄疫病毒O/NYOO株的分子生物学特性研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
5 邬苏晓;刘镇明;罗满林;戚一达;;口蹄疫病毒3ABC基因的原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
6 邱杨;肖性龙;刘建丽;李惠芳;张经纬;余以刚;吴晖;;口蹄疫通用型实时荧光RT-PCR检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
7 潘群兴;王永山;何孔旺;欧阳伟;王晓丽;诸玉梅;夏兴霞;;重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构建[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
8 张洪勇;金宁一;;口蹄疫病毒RNA组成、功能及分子致病机制的研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
9 鲁会军;韩松;郑敏;贾雷立;王凯;金宁一;;口蹄疫病毒3AB基因在重组杆状病毒中的表达及检测[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
10 张洪勇;金宁一;;口蹄疫病毒分子流行病学的研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
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1 中梓;六种结构蛋白被发现[N];医药经济报;2002年
2 江南雪舞;谈谈口蹄疫病毒[N];大众卫生报;2005年
3 吴星;口蹄疫对农产品市场的影响[N];期货日报;2005年
4 廖学时;构建感染性口蹄疫病毒粒子成功[N];医药导报(中药报);2004年
5 河北省畜牧兽医站 韩庆安(高级兽医师);春防牲畜口蹄疫[N];河北科技报;2006年
6 罗学宏;“手足口病”不是“口蹄疫”[N];家庭医生报;2007年
7 本报记者 刘丁;口蹄疫阴影下的“英国病人”[N];华夏时报;2007年
8 ;猪口蹄疫病的诊治[N];中国畜牧兽医报;2008年
9 刘书梅;春季应做好猪口蹄疫的防治工作[N];河南科技报;2007年
10 刘晔;“山羊绒洗净因素对口蹄疫病毒影响”通过鉴定[N];中国国门时报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吴雨霞;口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因在原核和真核细胞中的表达[D];甘肃农业大学;2003年
2 朱远茂;表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1重组牛疱疹病毒1型的构建及其免疫研究[D];东北农业大学;2010年
3 李勇;口蹄疫病毒3C(D)蛋白与宿主细胞因子Fascin-1相互作用研究[D];武汉大学;2010年
4 孙萌;口蹄疫病毒VP1抗原基因在模式植物叶绿体中的重组和表达[D];浙江大学;2003年
5 邵寒娟;A、O型口蹄疫双价疫苗研究[D];厦门大学;2004年
6 白兴文;我国O型泛亚1系口蹄疫病毒表型差异的分子基础[D];中国农业科学院;2012年
7 周艳君;猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定[D];东北农业大学;2005年
8 洪琦;口蹄疫—伪狂犬病二价与口蹄疫—猪细小—伪狂犬病三价基因工程疫苗的研究[D];华中农业大学;2005年
9 潘丽;口蹄疫病毒免疫原基因在番茄和拟南芥中的表达及转基因番茄动物免疫试验[D];中国农业科学院;2005年
10 易建中;抗A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒重组双价多肽疫苗研究[D];复旦大学;2005年
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1 杜宇;猪O型口蹄疫病毒VP_1基因的原核表达及重组蛋白的反应原性检测[D];山西农业大学;2005年
2 王光华;口蹄疫病毒结构蛋白VP1和VP1 C末端的免疫原性研究及VP1-ELISA方法的建立[D];甘肃农业大学;2007年
3 张先锋;口蹄疫病毒非结构蛋白基因3ABC、3AB、3A的克隆表达及3A蛋白间接ELISA方法的初步建立[D];新疆农业大学;2010年
4 田飞鹏;杆状病毒介导O型口蹄疫病毒P12A和3C基因在Sf9细胞和BHK细胞中的共表达[D];西北农林科技大学;2010年
5 朱丽杰;一株O型口蹄疫病毒分离株的全基因序列分析[D];东北农业大学;2007年
6 裴仉福;A型口蹄疫病毒结构蛋白VP_1基因的克隆及其在E.coli中的表达[D];甘肃农业大学;2004年
7 王炜;口蹄疫病毒P12A-3C基因在百脉根中的表达及其免疫豚鼠试验[D];中国农业科学院;2006年
8 赵毅;口蹄疫灭活疫苗中VP1基因分析方法的建立及应用[D];新疆农业大学;2009年
9 裴志花;牛O型口蹄疫病毒内蒙古疫苗株p1基因的克隆与序列分析[D];内蒙古农业大学;2005年
10 金华利;口蹄疫病毒vp1体外表达和DNA疫苗免疫效果的研究[D];新疆大学;2004年
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