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七个羊品种成纤维细胞库构建及其生物学特性研究

周雪雁  
【摘要】:本论文选取了太行黑山羊、山东济宁黑青山羊和白青山羊等我国优良地方品种羊及无角道赛特绵羊、特克塞尔绵羊、萨福克绵羊和安哥拉山羊等重要引进羊品种群体为研究对象,采用组织块细胞贴壁培养法,分别成功地构建了上述7个羊品种耳缘组织成纤维细胞库,并对其生长动力学、中期染色体、同工酶、微生物污染以及转化表达外源基因等特性进行了研究,旨在从细胞水平上对优良地方保护品种及重要引进羊品种遗传资源进行有效保存和利用,同时也为其他动物遗传资源保存提供可行性方法借鉴。7个品种的冻存样本含量为30~60之间,每个品种的冻存管数在150~180支之间,每个个体的冻存管数为5支以上,每支冻存管的细胞数量为3~5×10~6个细胞/ml。试验结果如下: 1、培养细胞形态为典型的成纤维型细胞,绝大部分呈梭形或不规则三角形,细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势,细胞增殖快,生长旺盛。 2、绘制的细胞生长曲线显示,复苏细胞生长状况很好,七个羊品种生长曲线均呈“S”型,每代细胞生长均经历了潜伏期、指数生长期和停滞期,符合体外细胞生长规律。 3、细胞冻存前后存活率计算结果表明,七个羊品种细胞在冷冻和复苏过程中可能受到一些外界因素的影响,复苏后存活率有所下降,但均保持在90%以上,传代后生长状况与冻存前基本一致,细胞形态和生长速度没有明显变化,冻存细胞生物学特征稳定。 4、微生物污染检测呈阴性,表明细胞未受到细菌、真菌、病毒及支原体污染,冻存细胞为健康单一的成纤维细胞。 5、核型分析结果为:太行黑山羊、山东济宁黑青山羊和白青山羊及安哥拉山羊的染色体数目均为2n=60条,共30对。其中,58条常染色体是由大小不同的29对端着丝粒染色体组成,X染色体同常染色体一样也是端着丝粒染色体,相当于1-3号染色体大小,Y染色体是与其他染色体有明显区别的中央着丝粒染色体,是最小的染色体;无角道赛特绵羊、特克塞尔绵羊、萨福克绵羊染色体数目均为2n=54,是由26对常染色体和1对性染色体构成,常染色体中大型的三对(1-3号)是容易区别的中央和亚中央着丝粒染色体,其他全部为大小不同的端着丝粒染色体,X染色体是最大的近端着丝粒染色体,Y染色体同山羊一样是最小的中央着丝粒染色体。七个羊品种细胞均以二倍体为主,山羊二倍体染色体数2n=60的细胞占镜检细胞的百分比为太行黑山羊98.2%,济宁黑青


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