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《山西农业大学》 2002年
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农杆菌组培及三种非组培法在小麦和玉米上转化外源Bar基因研究

梁雪莲  
【摘要】:分子生物学技术为作物抗逆品种选育开辟了新的途径。在农作物上开展抗除草剂基因转化有深刻的意义:(1)可一次性清除大田杂草,大幅度提高作物产量;(2)可以免耕或少耕,避免了土壤侵蚀,有一定的生态效益;(3)使高效、灭生性除草剂得到继续发展;(4)在杂种优势中,利用显性抗除草剂基因标记去杂去劣,利用隐性抗除草剂基因简化不育系的繁种程序,还可利用细胞质叶绿体抗除草剂基因提高制种质量。 本研究采用了农杆菌介导的遗传转化方法,系统比较了AS 在从诱导愈伤到感染再到共培养这一过程中的作用效果。还应用了萌动种胚处理、花粉介导和子房注射的方法,找出用农杆菌转移禾谷类作物抗除草剂基因的简便有效的方法,建立不依赖于植物细胞和组织培养的高效、规模化的转化体系。结果如下: 用农杆菌转化小麦授粉10-15天的幼胚,经5‰PPT筛选获得大量正常再生植株。PCR 及PCR-Southern 杂交检测证明23%再生苗为转化bar 基因植株。总结出一套农杆菌转化小麦幼胚高效获得转基因再生植株的处理程序。 用农杆菌介导转化玉米萌动种胚(此法已获国家专利),首先浸泡种子4 小时,再辅以划胚处理,后与适当浓度菌液(含AS)共培养24 小时,再播种。种苗经大田basta 喷洒筛选及PCR 电泳与Southern-blot 分子检测证明bar 基因已完整进入植株DNA 中,且其转化率比基因枪提高10 倍以上。此法简化了愈伤转化的繁琐漫长的组培过程,可操作性强,转化率高,很值得推广。 还用另外两种非组培转基因方法,花粉介导与子房注射法,在玉米上转化bar基因,并与萌动种胚法就转化率作了比较,经大田筛选及PCR 和PCR-Southern 检测证明三种方法均可获得转化植株。通过分析三种方法的转化机理,而且通过比较他们转化率及负作用的大小,认为萌动种胚法优于花粉介导法,更优于子房注射法。
【学位授予单位】:山西农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S512.1;S513

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