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《山西医科大学》 2011年
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TGF-β1对IL-1β诱导人牙周膜成纤维细胞分泌HGF影响的研究

段燕  
【摘要】:【目的】①体外建立人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)模型,为研究细胞因子对人牙周膜成纤维细胞功能的调控作用提供实验条件。②研究转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-1β(IL-1β)干预HPLFs后HGF基因表达的水平变化,为HGF网络调控HPLFs功能的研究提供新资料。 【方法】①对已冻存的第三代HPLFs进行复苏、分离、培养,观察HPLFs的生物学特性,建立稳定的HPLFs体外模型。②选择第五代形态良好,生长旺盛的HPLFs,随机分为实验干预组和对照组,实验干预组分别以不同浓度的IL-1β进行干预,即分别加入含有0.1ng/ml、1ng/ml、10 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml的无血清培养基,对照组不进行IL-1β干预,以新鲜DMEM培养基代替,然后各组均继续作用48h,采用RT-PCR法检测HPLFs中HGF的基因表达,并优选出IL-1β的最佳干预浓度。③选择第五代形态良好,生长旺盛的HPLFs,随机分为实验干预组和对照组,实验干预组分别以不同浓度的TGF-β1和10ng/ml的IL-1β联合作用,TGF-β1的浓度分别为1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml的无血清培养基,对照组为加入含有10ng/ml IL-1β的无血清培养基进行干预,然后各组均继续作用48h,采用RT-PCR法检测HPLFs中HGF的基因表达。④利用医学图像分析系统对结果进行图像分析和数据收集,数据结果均以均数±标准差来表示,采用SPSS13.0软件进行分析,组间比较采用方差分析,多组间比较采用LSD-t检验,以P0.05为差异有统计学意义。 【结果】①经IL-1β单独作用,HPLFs中HGF的基因表达水平上调,并优选出IL-1β的最佳干预浓度为10ng/ml(P0.05);②当一定浓度的TGF-β1和10ng/ml的IL-1β共同作用于HPLFs后,该细胞中HGF的基因表达水平比单独IL-1β作用组低(P0.05)。 【结论】①IL-1β作用于HPLFs能够明显的诱导HGF mRNA的表达;当IL-1β浓度为0.1、1、10ng/ml时,HGF基因表达水平随IL-1β浓度的升高而上调,且呈剂量依赖性;与IL-1β浓度为10ng/ml时相比,当IL-1β浓度为50、100ng/ml时,HGF基因表达水平未见明显增高。②IL-1β对HPLFs中HGF的表达有明显的诱导作用,当IL-1β和TGF-β1联合作用时,在IL-1β刺激浓度保持不变的情况下,HGF的基因表达随TGF-β1浓度的升高其表达水平下调,由此可以推测,TGF-β1对IL-1β干预HPLFs分泌HGF能够产生拮抗作用。
【学位授予单位】:山西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R780.2

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