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《山西医科大学》 2011年
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白藜芦醇激活H9c2心肌细胞ERK1/2信号转导通路抗氧化应激损伤的机制研究

薛磊  
【摘要】:目的 培养H9c2心肌细胞建立氧化应激模型,同时选择并选用ERK1/2途径作为研究对象,利用ERK1/2通路特异性阻断剂U0126进一步探讨可能的作用机制,观测白藜芦醇对心肌细胞抗氧化应激损伤的保护及机制。 方法 通过传代方法培养H9c2心肌细胞。实验分为以下5组:正常对照组、过氧化氢(H202)组、白藜芦醇+H2O2组、白藜芦醇+UO126+H2O2组、UO126+H2O2组。实验终止后,在倒置相差显微镜下观察H9c2心肌细胞形态及变化,测定乳酸脱氢酶(LDH)的释放及超氧化物歧化酶(SOD)的活性,采用硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛(MDA)含量,采用流式细胞仪来检测心肌细胞的凋亡。采用Western-blot测定ERK1/2蛋白的表达。 结果 1.1.H2O2组较对照组LDH活性显著增加(998.08±23.07 vs 477.11±17.78, P<0.05),MDA活性也显著增加(32.05±1.76 vs 7.42±1.51, P0.05), SOD活性显著降低(15.43+4.52vs 35.03±2.17, P<0.05),比较两组差异具有统计学意义。 2.白藜芦醇+H2O2组较H2O2组,LDH活性显著降低(617.3±11.23 vs 998.08±23.07,P0.05),MDA活性也显著降低(16.33±1.68 vs 32.05±1.76, P<0.05), SOD活性显著增加(29.03+3.18 vs 15.43+4.52,P0.05),比较两组差异具有统计学意义。 3.凋亡率结果显示,空白对照组细胞生长良好,凋亡率极低为6.73±2.38。H202组出现大量凋亡细胞,其凋亡率为56.2±4.73,与空白对照组相比差别有统计学意义(P0.05);白藜芦醇+H202组其凋亡率显著降低为38.17+3.08,与H202组相比差别有统计学意义(P0.05)。 4. UO126+H2O2组比较对照组LDH活性显著降低(658.19±21.38 vs 998.08±23.07,P0.05),MDA活性也显著降低(20.01±3.16 vs 32.05±1.76, P<0.05), SOD活性显著增加(22.33±1.78 vs 15.43±4.52, P<0.05),比较两组差异具有统计学意义。而白藜芦醇+UO126+H2O2组与UO126+H2O2组的LDH、MDA、SOD活性比较,均无显著性差异。 5.H2O2可显著上调ERK1/2的表达,白藜芦醇+H202组可显著下调H202所致的ERK1/2表达,上述差异均具有统计学意义;而白藜芦醇+UO126+H2O2组与白藜芦醇+H202组比较,ERK1/2表达无差异。 结论 1.H2O2可以诱导H9c2心肌细胞发生氧化作用,并发生细胞凋亡; 2.白藜芦醇可以拮抗H202所致的H9c2心肌细胞氧化作用,抑制H202所致的H9c2心肌细胞凋亡,对H9c2心肌细胞有保护作用; 3.白藜芦醇发挥对H9c2心肌细胞的保护作用可能是通过ERK1/2通路实现的。
【学位授予单位】:山西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R965

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