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《山西医科大学》 2011年
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叶酸与5-Aza-CdR对CIN阶段DAPK抑癌基因启动子区甲基化的影响

杨夕粉  
【摘要】:目的: 1.检测宫颈上皮内瘤变组织标本中抑癌基因DAPK(死亡相关蛋白激酶)启动子区的甲基化状态,探讨其在宫颈病变发生发展中的作用; 2.研究叶酸与5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)在逆转宫颈上皮内瘤变中的作用,为宫颈癌前病变阶段的药物治疗提供理论依据。 方法: 1.标本来源收集2010年1月至2011年1月间山西医科大学第二医院妇产科门诊收治的宫颈上皮内瘤变患者的病变组织,取宫颈同一点病变组织离体后,立即一分为二,一份甲醛固定做常规病理检查,另一份放入凉的磷酸缓冲盐溶液中实验用。 2.检测抑癌基因DAPK启动子区的甲基化状态取CIN患者的病变组织块,将每例标本分为三等份,根据不同药物干预情况,分为单独5-Aza-CdR干预组,叶酸与5-Aza-CdR两药联合干预组,及空白对照组(即干预前组)。采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR ,MSP)技术,共检测60例人宫颈上皮内瘤变组织块干预前后DAPK基因启动子区的甲基化状况。 3.结果判定取10μL PCR产物在2%琼脂糖凝胶上电泳,Ethidium Brmide染料染色,成像仪观察并摄像。获得甲基化产物,无论是否出现非甲基化产物,均判定为甲基化阳性;只出现非甲基化产物时计为非甲基化;既未获得甲基化产物也未获得非甲基化产物则标志本次实验失败。 4.统计学分析采用SPSS13.0软件包进行卡方检验,P0.05为差异有统计学意义。 结果: 1.60例宫颈上皮内瘤变组织块DAPK基因总甲基化率为21.7%(13∕60),随着病变程度的加重,DAPK基因的甲基化率呈升高的趋势。 2.60例标本经药物干预24小时后,单独5-Aza-CdR组、两药联合组的甲基化率分别降为8.3%(5∕60)、1.7%(1∕60)。叶酸与5-Aza-CdR两药联合组去甲基化效果明显优于5-Aza-CdR单药组,干预前后三组相比差异有统计学意义(P0.05)。 结论: 1.DAPK抑癌基因的异常高甲基化是宫颈病变发生发展过程中的重要事件,逆转DAPK基因的高甲基化状态有可能成为预防宫颈癌发生,遏制宫颈上皮内瘤变进展的新疗法。 2.联合应用叶酸与5-Aza-CdR可能逆转DAPK基因的高甲基化状态,有望成为治疗宫颈上皮内瘤变的有效药物。
【学位授予单位】:山西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R737.33

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