收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

MDS患者骨髓MSCs分子遗传学分析和CsA对MDS患者骨髓MSCs增殖凋亡影响的研究

王雁玲  
【摘要】:研究背景骨髓MSCs不仅具有自我更新、多向分化潜能和增殖特性等干细胞共同的特点,而且具有免疫调节功能,同时MSCs仅低水平表达人类主要组织相容性Ⅰ类分子,而不表达人类主要组织相容性Ⅱ类分子,故而免疫原性较低。因此骨髓MSCs在医学各个领域都具有研究和应用价值,目前已在多个临床科室中应用。骨髓MSCs成为干细胞研究的热点。 MDS是一组恶性克隆性疾病,遗传不稳定导致有明显的急性髓系白血病转化倾向,从探索MDS发病机制入手以研究急性白血病的发病机制,因而对MDS的研究也是现在血液病研究的一个热点。异基因造血干细胞移植是目前可以治愈MDS的唯一方法,一般认为,进展型MDS、输血依赖、无5q-的患者应尽早移植,但是移植后严重GVHD仍然是MDS患者移植后死亡的主要原因。而体外培养的BMSCs回输体内后,具有促进放化疗后的骨髓造血恢复,造血重建和减少GVHD发生的作用。 在肿瘤的发展过程中,恶性克隆和骨髓微环境的相互作用起着重要的作用,但对骨髓基质细胞的特性的研究甚少。MDS的发病机制目前还不十分清楚,可能涉及造血干/祖细胞增殖与凋亡、造血微环境、免疫过程的参与、基因甲基化等多方面。由于MSCs是造血微环境的重要组成部分,在造血调控中发挥着重要作用,对造血细胞的增殖和分化起着重要的调控作用。MDS患者MSCs的异常也可能对MDS发生、发展起着促进作用。MDS是一组异质性恶性克隆性造血干细胞疾病,对于MDS患者骨髓MSCs有无相应的克隆性基因异常改变,仍存在争议。 凋亡与细胞增殖一起维持机体的稳态,细胞凋亡过程的抑制和凋亡调节基因的紊乱,是疾病特别是肿瘤形成的另一重要机制,造血系统中因异常细胞凋亡引发各种血液病已日益引起人们关注。通过诱导肿瘤细胞的凋亡,可以达到治疗肿瘤的目的。CsA作为免疫抑制剂,在临床上广泛应用于器官移植后的抗排斥反应和治疗自身免疫性疾病,同时CsA也已被常用于MDS患者的治疗。近年来研究发现CsA可诱导HL-60和K562细胞凋亡。临床应用CsA是否对MDS患者组骨髓MSCs产生影响值得研究,但是关于CsA对MDS患者MSCs增殖和凋亡的影响作用鲜见报道。 研究目的本研究采用细胞遗传学和间期荧光原位杂交技术分析MDS患者的骨髓单个核细胞染色体的数目和结构,并研究MDS患者骨髓MSCs的生物学特性和核型,分析MDS骨髓MSCs核型是否存在与患者骨髓单个核细胞相应的克隆性基因异常改变;研究CsA对MDS患者MSCs增殖和凋亡的影响作用,从而探究MDS患者骨髓MSCs是否有异常,MDS患者骨髓MSCs在发病中是否发挥作用,也为MDS患者的自身骨髓MSCs治疗提供依据。 研究方法(1)对42例MDS患者应用细胞遗传学和/或间期荧光原位杂交技术分析MDS患者的骨髓单个核细胞。(2) MDS患者骨髓MSCs的培养及鉴定。对42例MDS患者骨髓采用贴壁筛选法分离、培养、纯化骨髓MSCs,同时采集15例营养不良性贫血患者的骨髓标本作为对照组。观察骨髓MSCs在光镜下的生长特征,诱导骨髓MSCs成为胰岛分泌细胞,对所获得的细胞进行免疫表型(CD29、CD34、CD45和CD105)的检测,确定所获细胞绝大多数为骨髓MSCs。(3)收集经细胞遗传学或/和应用荧光原位杂交技术检测证实有明确克隆性异常的17例MDS初诊患者的骨髓标本,培养为骨髓MSCs,应用间期荧光原位杂交技术术分析这些MDS患者的骨髓MSCs。(4)收集15例未经治疗的以RAEB-Ⅰ和RAEB-Ⅱ为主的MDS患者骨髓,同时采集15例营养不良性贫血患者的骨髓标本作为对照组。培养为骨髓MSCs,将MDS患者组和对照组分别分为4组,未加药组、1×103ng/mlCsA浓度组、1×104ng/mlCsA浓度组、5×104ng/mlCsA浓度组;应用MTT分析CsA对MDS患者的MSCs的增殖的影响。(5)收集15例未经治疗的以RAEB-Ⅰ和RAEB-Ⅱ为主的MDS患者骨髓,同时采集15例营养不良性贫血患者的骨髓标本作为对照组。培养为骨髓MSCs,将MDS患者组和对照组分别分为3组,未加药组、1×103ng/mlCsA浓度组、1×104ng/mlCsA浓度组,应用流式细胞仪测定、RT-PCR等技术分别分析CsA对MDS患者的MSCs的凋亡率、以及CsA对MDS患者MSCs的Caspase-3的mRNA表达和蛋白酶活性的影响。 研究结果(1) MDS患者的骨髓单个核细胞经检测证实存在明确的克隆性异常,如5q-、+8、7q-、20q-、i(17)、+15、+22等异常。(2) MDS患者的骨髓MSCs培养、鉴定:骨髓MSCs呈梭形、漩涡状生长。骨髓MSCs经成胰岛样细胞诱导后表达胰岛样细胞特征。流式细胞仪表面标志鉴定显示高表达MSCs的重要标志物CD29、CD105,不表达造血细胞表面抗原如造血前体细胞标志抗原CD34和白细胞标志抗原CD45。MDS患者的骨髓MSCs胰岛样细胞诱导分化能力同对照组。RCUD、RCMD类型的MDS患者骨髓MSCs原代细胞培养时间与健康对照组原代细胞培养时间相近但稍长。RAEB-Ⅰ、RAEB-Ⅱ类型的MDS患者骨髓MSCs原代细胞培养时间较健康对照组稍短,与慢粒患者AA患者骨髓MSCs原代细胞培养时间相近但稍长。(3)对于经检测证实骨髓单个核细胞存在明确的克隆性异常的MDS患者,其骨髓MSCs未发现存在相应的克隆性异常。(4) MDS患者MSCs组的吸光度的平均值比对照组MSCs组高,吸光度值不随CsA浓度增加而改变,CsA对MDS患者组和正常对照组MSCs无促进增殖作用,CsA对MSCs的增殖无显著影响。(5)随着加入CsA浓度的逐渐增加,MDS患者MSCs的Caspase-3mRNA表达上升,其Caspase-3蛋白酶活性逐渐增强,MDS患者MSCs的凋亡率增加。CsA对正常对照组MSCs无促进凋亡作用。 研究结论(1) MDS患者的骨髓单个核细胞中确实存在克隆性的基因异常改变,如5q-、+8、7q-、20q-、i(17)、+15、+22等异常。但是检测这些患者的MSCs,未发现相应的基因异常标志。(2) MDS患者的骨髓MSCs形态、免疫表型特征和胰岛样细胞诱导分化能力同对照组。与对照组原代细胞培养时间相比,不同类型的MDS患者骨髓MSCs原代细胞培养时间长短不同。RAEB-Ⅰ和RAEB-Ⅱ类型的MDS患者MSCs细胞增殖状态活跃,可能显示有一定的恶性程度。(3) MDS患者组MSCs的增殖活性明显较对照组高。CsA对于对照组和MDS患者组的MSCs无促进增殖作用。(4) CsA对于对照组MSCs无促进凋亡作用。但CsA通过提高MDS患者MSCs的Caspase-3的mRNA表达和蛋白酶活性,促进MDS患者MSCs的凋亡。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 韩丹壘;郭静明;;骨髓微环境和骨髓增生异常综合征的研究进展[J];中国全科医学;2012年21期
2 曹德聪;钱德芳;吴雄飞;徐园翠;蒋雁飞;;骨髓小粒展片切片的细胞组织学观察[J];浙江医学;1987年03期
3 卢俊钦;孙文立;毛文伟;;骨髓抑制-再生小鼠模型的建立及组织学改变的动态观察[J];上海交通大学学报(医学版);2010年07期
4 闫浩;陈彤;;骨髓间充质干细胞与骨髓内细胞间相互作用关系及其进展[J];生物医学工程学杂志;2013年04期
5 马兰芳;穆丽萍;汪明春;;骨髓小粒对再生障碍性贫血的诊断、分型及预后的意义[J];兰州医学院学报;1979年01期
6 常春康;赵佑山;;骨髓增生异常综合征骨髓微环境研究现况的认识[J];诊断学理论与实践;2013年01期
7 邵小虎;乐黄莺;;骨髓微环境变化引发的疾病[J];中国组织工程研究;2013年01期
8 邵茜雯;骨髓增生异常综合征骨髓方面的研究进展[J];国外医学.输血及血液学分册;2003年06期
9 付冰;林艳娟;;骨髓微环境介导的白血病耐药机制研究进展[J];中国实验血液学杂志;2011年03期
10 王小山;陈钰;;骨髓微环境与骨髓增生异常综合征[J];内科理论与实践;2012年02期
11 周英杰,梁美宜,张秀勤,高桂英,齐淑玲,李卫萍,付津;肝硬化骨髓微环境与造血祖细胞集落相关性的研究[J];中国病理生理杂志;1990年04期
12 ;骨髓微环境的病理观察(附血液肿瘤性疾病36例分析)[J];中国病理生理杂志;2001年11期
13 谢家印;王东;;靶向于多发性骨髓瘤细胞和骨髓微环境的治疗进展[J];重庆医学;2008年20期
14 高武,宋艳秋,李薇,王冠军;血液疾患骨髓微血管密度的研究[J];中国实验血液学杂志;2004年06期
15 靳雪琴;白庆咸;梁蓉;;骨髓微环境与多发性骨髓瘤[J];白血病.淋巴瘤;2007年04期
16 杨佩颖;贾伟颖;赵林林;贾英杰;;中药对化疗后骨髓抑制的调节作用[J];湖南中医杂志;2014年05期
17 李晓英;张宇明;全宏勋;;补血中药抗骨髓抑制作用的研究进展[J];医学综述;2009年22期
18 沈文怡,陆化;骨髓微环境与多发性骨髓瘤[J];白血病.淋巴瘤;2004年03期
19 李颖;生物因子治疗骨髓抑制的研究进展[J];国外医学(放射医学核医学分册);2000年04期
20 吴洪;莫东华;;靶向骨髓微环境治疗多发性骨髓瘤的进展[J];医学综述;2010年04期
中国重要会议论文全文数据库 前7条
1 靳风艳;孟恒星;于珍;李桥川;邹德慧;邱录贵;;SDF-1/CXCR4及MMP-9在G-CSF介导的造血干细胞动员中作用的研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
2 魏艾红;;血液病骨髓微循环与组织通道的认识与理解[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
3 于沛;王继英;何侃;邢海燕;田征;唐克晶;王敏;饶青;;Rac1-GTP酶的活化在骨髓微环境中白血病细胞的滞留及其休眠期维持中的作用[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
4 孔海丽;马道新;刘传芳;;Th亚群细胞因子在急性髓性白血病骨髓微环境中的表达及意义[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
5 孔海丽;马道新;刘传芳;;Th亚群细胞因子在急性髓性白血病骨髓微环境中的表达及意义[A];中华医学会血液学分会第十三届全国血栓与止血学术会议暨“血栓栓塞性疾病(血栓与止血)基础与临床研究进展”论文摘要汇编及学习班讲义[C];2011年
6 刘金文;黄永明;石宇雄;许少健;;骨癌通泰方对骨肿瘤化疗骨髓抑制的保护作用[A];中华中医药学会骨伤分会第四届第二次会议论文汇编[C];2007年
7 张璐;胡豫;孙春艳;王雅丹;褚章波;;慢病毒shRNA干扰骨髓瘤细胞BDNF表达在骨髓微环境中对血管新生的影响[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 路艳;补肾法对骨髓抑制模型骨髓干细胞的调控机理研究[D];广州中医药大学;2012年
2 路慧丽;Mig重组蛋白的制备及其预防化疗骨髓毒副作用的研究[D];上海交通大学;2007年
3 王雁玲;MDS患者骨髓MSCs分子遗传学分析和CsA对MDS患者骨髓MSCs增殖凋亡影响的研究[D];山西医科大学;2011年
4 李学锋;骨髓刺激后骨髓干细胞移植治疗肢体缺血性疾病的基础与临床研究[D];苏州大学;2011年
5 孙春艳;BDNF/TrkB异常表达在多发性骨髓瘤发病中的作用及机理研究[D];华中科技大学;2006年
6 徐其渊;CXCR4表达在衰老骨髓细胞中的变化及其对血管再生功能的影响[D];浙江大学;2010年
7 靳凤艳;SDF-1/CXCR4及MMP-9在G-CSF介导的造血干细胞动员中作用的研究[D];中国协和医科大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘丽波;血管内皮生长因子及骨髓微血管密度在造血系统疾病中意义的探讨[D];吉林大学;2005年
2 田竑;骨髓增殖性肿瘤骨髓间充质干细胞生物学特性的研究[D];苏州大学;2012年
3 方青波;兔骨髓干细胞移植联合骨髓动员治疗后肢缺血实验研究[D];石河子大学;2009年
4 郭卫华;豆类丝核菌次级代谢产物对化疗致骨髓抑制的保护及对肝肾功能的影响[D];西北农林科技大学;2009年
5 田甜;辅助性T细胞在不同阶段急性髓性白血病患者骨髓微环境中的表达[D];山东大学;2014年
6 徐黎;骨髓增生异常综合征患者骨髓基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4的表达水平和意义[D];苏州大学;2010年
7 张雅雯;健脾补肾化瘀法化疗后骨髓抑制保护作用的临床研究[D];广州中医药大学;2008年
8 胡问成;骨髓微环境介导急性髓系白血病细胞化疗耐药及机制研究[D];华中科技大学;2011年
9 吴艳;再生障碍性贫血患儿骨髓MSC造血支持作用与免疫抑制作用的研究[D];重庆医科大学;2008年
10 郭少鹭;重组人粒细胞集落刺激因子改善胃癌患者化疗后骨髓抑制的临床观察[D];山东大学;2012年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978