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利用SNPs进行唐氏综合征无创性产前诊断的可行性研究

卫小静  
【摘要】:为了探讨利用21号染色体上SNP(单碱基多态性,single-nucleotidepolymorphism SNP)位点进行唐氏综合征产前诊断的可行性,建立一种快速、准确、简便并适于推广至临床的唐氏综合征无创产前诊断方法。我们用不同的实验方法对21号染色体上的多个SNP位点进行研究,以达到诊断唐氏综合征的目的,本研究包括以下两部分: 第一部分:运用基于异源双链生成的单管PCR-DHPLC技术检测21号染色体数目的研究 目的:建立一种基于异源双链生成的单管PCR-DHPLC(变性高效液相色谱denaturing high performance liquid chromatography DHPLC)技术,用于检测21号染色体的数目。 方法:根据所研究靶SNPs位点上下的碱基序列设计PCR引物,优化PCR反应及DHPLC的检测条件,根据DHPLC的色谱图对21号染色体的数目进行检测,分析DHPLC色谱图中的四个峰高度之比若为1:1:1:1即为二倍体;四个峰高度之比为2:2:4:1或2:2:1:4即为三倍体。 结果:对27例已知基因型的DNA标本(14例正常人标本,13例唐氏综合征标本)运用PCR-DHPLC技术对21号染色体的数目做出检测。除3例唐氏综合征标本的靶SNPs位点为纯合子不能做出诊断外,其余标本均与已知的基因型相吻合。 结论:运用基于异源双链生成的单管PCR-DHPLC技术分析色谱图中的峰高比可用来检测21号染色体的数目,此方法准确,简便,快速,重复性好,但对于靶SNP位点为纯合子的标本则不能做出诊断,尚存在有局限性。 第二部分:运用MLPA—AB3130技术检测21号染色体上PLAC4-SNPs的杂合度探讨其用于产前检测唐氏综合征的可行性。 目的:应用多重连接依赖探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probeamplification,MLPA)联合AB3130(高压毛细管电泳仪)检测21号染色体上PLAC4基因上的多个SNPs,研究其多态性,探讨应用PLAC4-SNPs检测唐氏综合征的可行性。 方法:检索出PLAC4基因上的94个SNPs碱基序列,从中选出13个SNPs,根据SNPs上下的碱基序列合成探针,选用100例染色体核型分析结果正常的DNA标本,应用MLPA—AB3130技术进行实验,研究其多态性情况。对于每个靶SNP位点而言,电泳图谱中若出现双峰即为杂合子,出现单峰则为纯合子。 结果:应用上述方法对100例正常DNA标本做了检测,13个SNPs中Rs4818219,Rs8130833,Rs59066201,Rs9977003,Rs3804026的杂合度较高,分别为0.43;0.41;0.38;0.29;0.18。可进一步用于CffmRNA→cDNA→MLPA→AB3130检测唐氏综合征。 结论:虽然本研究中所选用的正常DNA标本存在有地域性,且样本量较少,但我们的研究结果为进一步利用CffmRNA-SNPs进行无创产前诊断提供了依据,奠定了基础。因为按Lo等的理论,如果这5个SNPs同时做为靶位点,其中只要有一个为杂合子即可对21三体的标本做出诊断。故将孕妇血中PLAC4基因胎盘特异表达的mRNA先反转录为cDNA,再应用MLPA—AB3130技术检测SNPs进行唐氏综合征产前诊断具有可行性和应用前景。


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