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限食下活性维生素D对大鼠寿命的影响

冷婧  
【摘要】:目的观察老龄SD大鼠在不同饮食、不同剂量活性维生素D3干扰下的细胞自噬程度及自噬相关蛋白LC3II/LC3I的灰度比值,检测大鼠外周血端粒相对长度估定大鼠相对寿命,以期明确活性维生素D3是否导致细胞自噬发生并对大鼠寿命产生影响。 方法购买14月龄健康雄性SD大鼠64只,按体重随机分别分成两个大组,分别为限制饮食组(5日进食,2日禁食)和非限制饮食组,限制饮食组和非限制饮食组各自再随机分为四个亚组,分别为:(限食组用ABCD表示,对照组用AˊBˊCˊDˊ表示):A/Aˊ组:不添加活性VD3;B/Bˊ组:低剂量活性VD[(0.01ug/kg)/d];C/Cˊ组:中剂量活性维生素D[(0.1ug/kg)/d];D/Dˊ组:高剂量活性维生素D[(0.4ug/kg)/d],共8组,每组8只按照分组,给予不同饮食和不同剂量活性维生素D灌胃干预。经过126天不同饮食和不同剂量活性维生素D灌胃干预后。通过透射电镜观察大鼠肝脏细胞自噬情况,通过用western-blot的方法测定自噬小体标记物LC3II/LC3I的灰度比值对细胞的自噬活性进行半定量分析,比较不同组别大鼠LC3的表达及发生自噬的程度和差异。流式荧光术检测大鼠外周血淋巴细胞端粒相对长度,估定大鼠相对寿命。用各组大鼠端粒相对长度与各组自噬情况联合进行相关性的分析。 结果(1)电镜统计分析结果显示:A组大鼠肝脏自噬泡与胞浆面积比值B、C、D组,且差异有统计学意义(p0.05);B、C组大鼠肝脏自噬泡与胞浆面积比值差异无统计学意义(p0.05)。D组大鼠肝脏自噬泡占胞浆面积的比值A、B、C组,且差异有统计学意义(p0.05)。Aˊ,Bˊ,Cˊ,Dˊ组大鼠肝脏自噬泡占胞浆面积的比值的差异情况和ABCD组一样。在不同剂量活性VD3干扰下的下除外C和Cˊ组大鼠肝脏自噬泡占胞浆面积的比差异没有统计学意义(p0.05)之外。其余不同VD3干扰的限食组和非限食组之间差异都有统计学意义(p0.05)。(2)LC3-II/LC3-I结果显示:LC3-II/LC3-I结果显示:ABC组LC3-II/LC3-I的比值D组,差异有统计学意义(p0.05),而ABC三组之间差异没有统计学意义。AˊBˊCˊ三组LC3-II/LC3-I比值为:CˊBˊAˊ,且三组之间差异都有统计学意义(p0.05)。Dˊ组LC3-II/LC3-I比值Aˊ,且差异有统计学意义(p0.05)。Dˊ组LC3-II/LC3-I比值与Bˊ和Cˊ组相比差异都没有统计学意义。Aˊ组LC3-II/LC3-I比值BˊCˊDˊ组,且差异有统计学意义(p0.05)。在不同剂量活性VD3干扰下的下除外C和Cˊ组LC3-II/LC3-I比值比差异没有统计学意义(p0.05)之外。其余不同VD3干扰的限食组和非限食组之间LC3-II/LC3-I比值差异都有统计学意义(p0.05)。(3)Flow-fish的结果显示:A、B、C组大鼠端粒长度D组,且差异有统计学意义(p0.05),而它们三组间差异没有统计学意义。BˊCˊ组大鼠端粒比AˊDˊ组大鼠端粒长度长,且差异有统计学意义(p0.05)。BˊCˊ之间端粒长度差异无统计学意义。AˊDˊ组端粒长度差异无统计学意义。 结论(1)大剂量VD3在生理状况下也可以引起细胞自噬,不同剂量VD3引起细胞自噬情况不同。(2)限制饮食和活性VD3引起的细胞自噬没有差异。(3)活性VD3和限制饮食引起的细胞自噬没有协同作用。(4)过度细胞自噬可能会使寿命减短。


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