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高迁移率组蛋白-1及其受体在尘肺发病中的作用

白宇  
【摘要】:目的:探讨高迁移率组蛋白1(high mobility group box protein1HMGB-1)、可溶性晚期糖基化终末产物受体(soluble receptor of advanced glycation end-products sRAGE)在煤工尘肺发病中的作用,研究二氧化硅(SiO2)刺激人支气管上皮细胞(16hunman bronchial epithelia,16HBE)对晚期糖基化终末产物受体(receptor of advanced glycation end-products RAGE)及配体-钙粒蛋白(S100)、HMGB-1的影响。 方法:1.选择西山矿务局接触煤矽尘20-35年的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期煤矽肺病人作为研究对象,健康对照选择对象为同一煤矿的未接尘人群。对研究对象行静脉采血,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测量血清中HMGB-1、sRAGE的表达。同时检测研究对象的肺通气功能。2.取对数生长期的16HBE细胞用100μg/mlSiO2刺激培养。实验分为3组:只加无血清培养液空白对照组;阴性对照组;加入100μg/mlSiO2刺激培养的实验组,观察4h、24h、48h,每组设四个平行对照。采用荧光免疫细胞化学技术测定RAGE、S100的表达;Western blot技术测定HMGB-1的蛋白含量。 结果:1.煤工尘肺血清实验结果显示: 1)病例组与健康对照组相比:煤工尘肺患者血清中的sRAGE含量均高于正常对照组,差异有医学统计学意义(P0.05),随着煤工尘肺期别的增高sRAGE表达量增加,差异有医学统计学意义(P0.05)。 2) HMGB1在健康对照组与煤工尘肺患者中均有表达,差异有医学统计学意义(P0.05),在不同的煤工尘肺期别中,HMGB1在Ⅰ、Ⅱ期时表达升高但在Ⅲ期煤工尘肺中出现降低,差异有医学统计学意义(P0.05)。 3)肺通气功能指标FVC、FEV1/FVC、FEV1显示:随着煤工尘肺期别的增加,肺通气量减少,差异有医学统计学意义(P0.05)。肺通气功能指标FVC、 FEV1/FVC、FEV1与煤工尘肺患者血清中HMGB1浓度相关性分析显示:HMGB1与肺功能损害在Ⅰ、Ⅱ期煤工尘肺病人中具有一定的平行关系,通过统计学相关分析,Ⅰ期煤工尘肺中HMGB1与肺功能FVC、FEV1/FVC、FEV1的相关系数分别为-0.764、-0.540、-0.812,(P0.05)。Ⅱ期煤工尘肺中HMGB1与肺功能FVC、FEV1/FVC、FEV1的相关系数分别为-0.825、-0.512、-0.843,(P0.05)。两期煤工尘肺中除FEV1/FVC外HMGB1与肺功能均有显著性的负相关。2.Si02刺激培养16HBE细胞结果显示: 1)100μg/mlSiO2实验组S100含量显著增加,并随时间的延长而增加,差异有医学统计学意义,(P0.05),实验组S100的表达均高于空白对照组,差异有医学统计学意义,(P0.05)。 2)每个观察时间点的实验组RAGE的平均荧光光密度值低于空白对照组,差异有医学统计学意义,(P0.05),且随着时间的延长RAGE的表达值降低,差异有医学统计学意义,(P0.05)。 3)实验组HMGB1的表达均高于空白对照组,差异有医学统计学意义,(P0.05),随着时间的延长HMGB1表达量在4h、24h出现增高,但在48h出现降低,差异有医学统计学意义,(P0.05)。 结论:1. sRAGE在正常人及煤工尘肺患者血清中均有表达,与煤工尘肺期别升高而升高并存在时间效应关系。HMGB1在正常人中有表达,与煤工尘肺病理过程存在密切关系。职业性接触煤矽尘造成肺通气功能显著降低,随煤工尘肺期别的增高,肺通气功能呈进行性下降。 2. RAGE在正常人支气管上皮细胞膜上有表达,Si02的刺激作用可以降低其表达。 3.SiO2能诱导16HBE细胞分泌S100,且随作用时间的延长,分泌增多。HMGB1在煤工尘肺前期呈进行性的升高,后期由于sRAGE抑制了炎症反应,HMGB1表达量降低。


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