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《山西医科大学》 2004年
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NK4因子原核基因工程表达体系的建立及抗肿瘤生物学活性研究

冯仟佳  
【摘要】:1 目的 1.1 建立NK4因子原核基因工程表达体系。 1.2 建立NK4因子分离纯化工艺。 1.3 NK4因子抗肿瘤活性的研究测定。 2 方法 我们通过原核基因工程表达体系制备出一种新型的抗肿瘤、抑制血管生成的蛋白质因子—NK4因子。采用体外实验法进行NK4蛋白因子的抗肿瘤活性测定,包括MTT法测定NK4因子对肿瘤细胞杀伤作用的选择、NK4因子的不同浓度对肿瘤细胞侵袭重组基底膜的影响、对小鼠黑色素瘤细胞与基底膜成分粘附能力的影响、对肿瘤细胞趋化性运动能力的影响、对大鼠动脉无血清培养形成微血管样结构的影响。 3 结果 3.1 成功建立pGEX-4T-1-NK4/BL21表达体系。 3.2 GST-NK4融合蛋白纯化及复性。 3.3 NK4因子的的体外实验证实:NK4(10ug/ml)组对人乳腺癌细胞株MCF-7、B16-BL6小鼠黑色素瘤高转移株、A2780(人卵巢癌)、人结肠癌细胞有抑制作用(抑制率30%),其中对B16-BL6小鼠黑色素瘤高转移株、A2780(人卵巢癌)、人结肠癌细胞的抑制率大于阳性对照组(顺铂)。 4 结论 利用基因工程技术, 成功建立pGEX-4T-1-NK4/BL21表达体系,并摸索了该表达体系的最佳实验室操作条件[1]。再经过复性和GST亲和层析得到纯品NK4因子。癌的侵袭、转移行为是恶行肿瘤最本质的两大特征,如何防止及治疗侵袭及转移成为癌治疗研究的焦点之一。通过体外实验证实NK4(10ug/ml)组对人乳腺癌细胞株MCF-7、B16-BL6小鼠黑色素瘤高转移 WP=4 株、A2780(人卵巢癌)、人结肠癌细胞有抑制作用(抑制率30%),其中对B16-BL6小鼠黑色素瘤高转移株、A2780(人卵巢癌)、人结肠癌细胞的抑制率大于阳性对照组(顺铂)。为其在治疗领域开发生物药品奠定初步实验和理论基础。
【学位授予单位】:山西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R346;R73-3

【参考文献】
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【共引文献】
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【二级参考文献】
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