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《山西医科大学》 2008年
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选择性COX-2抑制剂塞来昔布对人子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B生长抑制作用的研究

张丹丹  
【摘要】: 研究目的 近年的多个流行病学研究发现,非甾体类抗炎药物的应用与食管癌、胃癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌等多种肿瘤的发病率和死亡率的下降有关,因此,应用副作用更小的选择性COX-2抑制剂逐渐成为近年防治肿瘤研究中的热点。已有的相关研究多集中于消化系统方面,而该种抑制剂的应用对子宫内膜癌的作用如何报道较少,本研究即是在子宫内膜癌便改变组织中COX-2呈高表达的研究基础之上,利用体外培养的方法,用不同浓度的选择性COX-2抑制剂塞来昔布作用于人子宫内膜腺癌细胞相同时间后或在同一药物浓度下作用不同时间的条件下,从不同水平观察该药物对细胞的增殖和凋亡的影响,从而为临床药物治疗早期子宫内膜癌的可能性提供一定的实验依据。 材料与方法 本研究中采用的细胞为人子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B。将该细胞体外培养后,分别用0μm/L,6.25μm/L,12.5μm/L,25μm/L,50μm/L,100μm/L药物浓度的培养液培养24、48、72小时后,采用以下方法观察药物作用效果。 包括:⑴细胞贴壁,免疫组织化学SP法检测HEC-1-B细胞中COX-2蛋白的表达;⑵MTT法检测各药物浓度作用相同时间及相同药物浓度作用不同时间之后的各组细胞抑制率;⑶倒置相差显微镜观察药物作用一定时间前后细胞的形态学变化;⑷流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;⑸RT-PCR法检测不同药物浓度作用后COX-2 mRNA表达的变化情况。 结果 1、免疫组织化学法检测人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1-B中COX-2蛋白表达阳性,可以进行如下实验; 2、MTT法检测可见随着药物浓度增加,活细胞数逐渐减少,抑制率增高,同时,同一药物浓度作用时间越长,对细胞的抑制作用也越明显; 3、药物作用一定时间后,利用倒置相差显微镜观察可见细胞密度明显降低,细胞体积缩小,胞体变圆,细胞间隙明显增大,胞内可见明显的空泡结构; 4、流式细胞术检测可见药物作用后细胞发生G2/M期阻滞,随着药物作用时间延长,G2/M期的细胞逐渐增加,细胞凋亡率增高; 5、RT-PCR检测可见随着药物浓度增加,COX-2 mRNA的表达逐渐下降。 结论 1、人子宫内膜细胞系HEC-1-B中COX-2呈阳性表达; 2、塞来昔布可以有效的使细胞中的COX-2mRNA的表达下调; 3、塞来昔布对HEC-1-B细胞的增殖具有抑制作用,且这种抑制作用有较好的时间依赖性和剂量依赖性; 4、塞来昔布能够阻滞细胞的G2-M期,从而影响细胞增殖; 5、塞来昔布可诱导细胞凋亡。
【学位授予单位】:山西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R737.33

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