2型糖尿病大鼠心肌脂联素及其受体1表达的变化及替米沙坦干预的实验研究
【摘要】：
【目的】
糖尿病心肌病变(diabetic cardiomyopathy,DCM)是指心脏微血管病变和心肌代谢紊乱引起的心肌广泛性坏死等损害。糖尿病心肌病是导致糖尿病(diabetes mellitus,DM)患者死亡的主要原因之一。脂联素(adiponectin)被认为是脂肪组织所分泌的多种产物中与胰岛素抵抗关系最紧密的一个特异性细胞因子,其与脂联素受体结合后,准确有效地发挥相应的功能,但与糖尿病心肌病的关系尚有待揭示。替米沙坦是一种具有选择性PPAR-γ调节活性的血管紧张素II受体拮抗剂(angiotensin II type 1 receptor blocker,ARB),具有部分PPAR-γ激动剂的功能,近年来研究显示对于糖尿病心肌病变有一定的防治作用。本研究通过高糖高脂膳食饲养Wistar大鼠,再注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ),诱发胰岛素抵抗和高血糖,从而复制2型糖尿病(type 2 diabetesmellitus,T2DM)大鼠模型。在此基础上通过检测实验动物血清脂联素水平及其受体1(adiponectin receptor 1,AdipoR1)在心肌组织中的蛋白表达,探讨血清脂联素、AdipoR1与糖尿病心肌病变的关系;并给予2型糖尿病大鼠替米沙坦干预治疗,以研究其对2型糖尿病心肌病变的防治作用及其作用机制。
【方法】
使用随机数字表法从36只Wistar大鼠中随机抽取10只作为正常对照组(NC组),其余作为实验组。对照组喂以常规饲料,实验组喂以高糖高脂饲料(常规饲料中加入2.5%胆固醇、20%蔗糖、15%熟猪油)。4周后实验组大鼠出现胰岛素抵抗,再给予STZ 30 mg/kg尾静脉注射,破坏部分胰腺。于实验第6周末选取空腹血糖(FBG)7.8 mmol/L且伴有胰岛素敏感性降低者作为T2DM动物模型,并随机分为2组,即T2DM模型组(DC组,10只)、T2DM替米沙坦治疗组(DCT组,10只)。实验共持续18周。于第4、6周末测量大鼠体重,测定FBG、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素敏感指数(ISI)、血清三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)水平。于第18周末测量大鼠体重和心功能,腹主静脉取血后处死动物,然后迅速取出心脏,用生理盐水冲洗干净并用滤纸吸干水分后称重。取心尖部组织用中性福尔马林液固定,脱水,石蜡包埋,常规切片,供HE染色和免疫组化染色,其余心室部分迅速投入液氮中,冻透后储存于﹣70°冰箱,用于心肌脂联素浓度、心肌脂联素受体-1mRNA和蛋白表达、GLUT4和P-AMPK蛋白表达的检测。FBG、TG、TC用生化方法测定;FINS用放射免疫法测定;血清和心肌脂联素水平用酶联免疫吸附法(ELISA)测定;心肌脂联素受体-1mRNA表达用RT-PCR方法测定;AdipoR1在心肌组织中的表达用免疫组化法检测;心肌脂联素受体-1、P-AMPK和GLUT4蛋白表达用免疫印迹方法检测,使用计算机图像分析系统进行图像分析,计算AdipoR1的积分光密度值(IOD)。使用SPSS11.0统计软件处理实验数据。
【结果】
1.实验第4周末各项检测指标:实验组大鼠的体重高于正常对照组(P0.05),实验组FBG(7.80±0.23)mmol/L、FINS(29.90±0.53)IU/mL均高于正常对照组FBG(3.99±0.27)mmol/L、FINS(23.10±0.71)IU/mL(均P0.05),而ISI(-5.35±0.42)低于正常对照组ISI(P0.05)。
2.实验第6周末各项检测指标:注射STZ两周后,实验组大鼠FINS(23.40±1.99)IU/mL较前降低,与对照组(24.10±0.31)IU/mL比较无统计学差异(P0.05),其他特征继续存在,FBG(18.23±0.57)mmol/L高于正常对照组(3.95±0.29)mmol/L,ISI(-6.05±0.09)低于正常对照组(-4.55±0.08)(均P0.05),至此T2DM模型复制成功。
3.实验第18周末生化指标:NC组大鼠FBG(4.02±0.44)mmol/L、FINS(23.44±1.47)IU/mL、ISI(-4.55±0.14),DC组大鼠FBG(17.55±0.76)mmol/L、FINS(43.06±1.24)IU/mL及TG、TC水平均高于NC组,ISI(-6.59±0.17)均低于NC组(均P0.05);DCT组大鼠FBG(10.62±0.77)mmol/L、FINS(30.78±0.72)IU/mL和TG、TC水平均低于DC组,ISI(-5.79±0.08)均高于DC组(均P0.05)。
4.实验第18周末血清和心肌脂联素含量:DC组大鼠血清脂联素含量(1.09±0.03)μg/mL低于NC组(1.87±0.05)μg/mL(P0.05),DCT组(1.41±0.02)μg/mL高于DC组(P0.01)。相关分析表明大鼠血清脂联素含量与FINS呈负相关(r=-0.801,P0.05),与ISI正相关(r=0.778,P0.05)。DC组大鼠心肌脂联素含量(0.12±0.02)μg/mg低于NC组(0.21±0.02)μg/mg(P0.05),DCT组大鼠心肌脂联素含量(0.14±0.02)μg/mg高于DC组(P0.05)。
5.实验第18周末心肌AdipoR1蛋白表达:DC组大鼠血清脂联素受体-1含量(0.34±0.11)低于NC组(0.77±0.08)(P0.05),DCT组(0.47±0.09)高于DC组(P0.01)。
6.实验第18周末心肌GLUT4蛋白的表达:DC组大鼠心肌GLUT4含量(0.41±0.09)低于NC组(0.79±0.08)(P0.05),DCT组大鼠GLUT4含量(0.52±0.10)高于DC组(P0.05)。
7.实验第18周末心肌P-AMPK蛋白的表达:DC组大鼠心肌AMPK含量(0.47±0.12)低于NC组(0.72±0.10)(P0.05),DCT组大鼠心肌AMPK含量(0.57±0.10)高于DC组(P0.05)。
8.组织学改变:NC组:心肌纤维走行正常,心肌细胞核呈圆形或椭圆型,居细胞中央;DC组:心肌纤维走行较为紊乱,心肌纤维出现局灶性坏死,纤维细胞增生;心肌细胞存在不同程度的变性,细胞间界限不清;心肌细胞间成纤维细胞增生,胶原纤维增加,间质出现炎细胞浸润。DCT组:较DC组情况好转,心肌细胞变性明显好转。
【结论】
1.通过高糖、高脂饮食及小剂量STZ诱导的T2DM大鼠模型与人类T2DM具有相似特征,可用于T2DM及其并发症的研究。
2. T2DM大鼠心功能降低,血和心肌脂联素降低,心肌AdipoR1 mRNA和蛋白表达降低,心肌P-AMPK和GLUT4蛋白表达下降,提示脂联素及其受体表达下降与T2DM心肌糖代谢紊乱和心功能降低有关。
3.替米沙坦可增加血清脂联素水平及上调心肌组织AdipoR1的表达,调节糖脂代谢,改善胰岛素抵抗。替米沙坦可以提高2型糖尿病大鼠心肌脂联素受体表达的影响,可为糖尿病的治疗提供新的研究方向。
【关键词】：2型糖尿病 脂联素 脂联素受体-1 替米沙坦 胰岛素抵抗 【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R587.1
【目录】：
- 中文摘要5-8
- 英文摘要8-12
- 符号说明12-13
- 正文13-44
- 第一章 前言13-15
- 第二章 材料与方法15-25
- 第三章 结果25-27
- 第四章 讨论27-31
- 第五章 结论31-32
- 参考文献32-38
- 附表38-40
- 附图40-44
- 综述44-57
- 个人简介57-58
- 致谢58
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|
| 1 |
龚燕平,李春霖,母义明,田慧,陆菊明,潘长玉;脂肪酸对HepG2肝细胞脂联素受体表达的影响[J];北京医学;2005年05期 |
| 2 |
李春霖,龚燕平,田慧,陆菊明,李明,肖或君,母义明,潘长玉;脂联素受体在正常Wistar大鼠各组织的分布和表达[J];解放军医学杂志;2005年08期 |
| 3 |
王淑芳,催莹,赵家军2;脂联素及其分泌调节[J];中国动脉硬化杂志;2005年02期 |
| 4 |
叶承志,张龙江,王宏伟,林汉华;油酸诱导SW872前脂肪细胞分化过程中脂联素受体的表达[J];实用儿科临床杂志;2005年09期 |
| 5 |
郭啸华,刘志红,李恒,朱加明,黎磊石;实验性2型糖尿病大鼠模型的建立[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2000年04期 |
| 6 |
龚燕平,李春霖,田慧,金文胜,陆菊明,潘长玉;老年糖耐量异常者脂联素水平的改变及其影响因素[J];天津医药;2005年06期 |
| 7 |
王钦茂,洪浩,赵帜平,沈业寿,陈光亮;丹皮多糖-2b对2型糖尿病大鼠模型的作用及其降糖作用机制[J];中国药理学通报;2002年04期 |
| 8 |
于德民，吴锐，尹潍，袁咏;实验性链脲佐菌素糖尿病动物模型的研究[J];中国糖尿病杂志;1995年02期 |
| 9 |
李国强;糖尿病心肌病的临床与发病机理研究进展[J];中国综合临床;2003年03期 |
| 10 |
施亚雄,郑善德;洛沙坦治疗早期糖尿病肾病的研究[J];中华内分泌代谢杂志;2000年04期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
陈月;脂连素——新型的脂源激素[J];解放军医学杂志;2003年02期 |
| 2 |
温宇,王宏伟,施虹,胡秀芬,程佩萱,魏俊;血浆促酰化蛋白、脂联素在川崎病早期诊断中的作用[J];实用儿科临床杂志;2004年11期 |
| 3 |
高岩,苏志暖,郭锡熔;早产儿与足月新生儿血清脂联素水平比较[J];实用儿科临床杂志;2004年12期 |
| 4 |
张龙江,夏治,林汉华,王宏伟;重组人白细胞介素6对SW872脂肪细胞增殖和凋亡的影响[J];实用儿科临床杂志;2005年02期 |
| 5 |
郑年新,阮金秀,张永祥,葛召恒,乔善义,姚新生;六味地黄多糖在小鼠体内的吸收[J];中国药理学通报;2000年04期 |
| 6 |
贾伟平，项坤三，吴松华，杨世埙，潘晓平，王延庆，何进卫，唐峻岭，严钱勤，薛凤仙，翁青;腹内型肥胖的代谢特点及合并NIDDM后的变化[J];中国糖尿病杂志;1995年01期 |
| 7 |
刘永玉,毛良,莫启忠;实验性NIDDM大鼠模型[J];中华内分泌代谢杂志;1990年02期 |
| 8 |
陈名道;脂肪细胞产物与肥胖和代谢综合征[J];中华内分泌代谢杂志;2003年03期 |
| 9 |
唐金凤
,杨颖
,汪启迪
,李纪平
,顾卫琼
,洪洁
,李凤英
,陈名道;血清脂联素水平与肥胖度的关系[J];中华内分泌代谢杂志;2003年03期 |
| 10 |
顾卫琼,洪洁,张翼飞,陈宇红,赵红燕,唐金凤,孙首悦,赵咏桔,宁光;肥胖人群中血清瘦素、游离脂肪酸和脂联素水平的相互关系[J];中华内分泌代谢杂志;2003年03期 |
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