收藏本站
《山西医科大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

逆转录病毒载体介导的IL-1Ra和TGF-β1联合基因转染治疗兔膝骨关节炎的研究

李璐  
【摘要】: 骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种退行性关节疾病,多发于老年人群,严重影响了人们的生活质量,且需消耗大量的个人及社会财力。国内的统计资料表明,我国患有OA的人数占总人口的3%,其中大部分为膝OA,55岁以上人群X线有膝OA表现者约60%,65岁以上老年人OA的发病率可达85%,75岁以上的老年人中每人都有至少一个关节有OA变化。目前,传统的药物治疗和外科手段对OA的疗效有限,且无法阻止OA的进一步发展,近年来基因治疗为OA的防治开辟了一条新途径,受到越来越多的重视。将功能基因片段整合到基因载体内,再将基因载体转染入靶细胞中或转染入关节腔内,通过转基因的靶细胞持续大量分泌功能基因产物,在一个较长的时期保持局部治疗浓度,由于OA病变主要累及少数负重关节,因此适合应用关节内局部基因治疗。在临床应用基因治疗OA之前,我们有必要在细胞实验和动物实验中确证哪些基因或基因的组合会对OA产生更好的治疗效果,目前已有许多研究以表明基因疗法对OA的有效性,并且多基因联合治疗OA效果好于单基因,在本实验中,我们利用重组人IL-1Ra(一种很重要的拮抗基因)和TGF-β1(一种很重要的保护基因)基因从促进软骨基质合成和抑制软骨基质降解两个层面联合转染治疗OA。第一部分联合基因转染兔膝软骨细胞及对其增值代谢的影响 目的观察以逆转录病毒为载体,介导白介素-1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)基因与转化生长因子-β1(TGF-β1)基因共转染兔膝软骨细胞后的表达,及对其增殖代谢的影响。 方法将体外培养的软骨细胞分为空白转染组、空载体转染组、IL-1Ra单基因转染组、TGF-β1单基因转染组及IL-1Ra和TGF-β1双基因转染组。酶联免疫吸附分析法(ELISA)进行瞬时基因表达(细胞转染后48h)及稳定基因表达(筛选第4w)的检测;免疫组织化学染色法检测各组IL-1Ra、TGF-β1及Ⅱ型胶原的表达;流式细胞仪检测各组细胞生长周期比例。 结果空白组与PLNCX_2空载体转染组的上述指标差异无显著性(P>0.05);ELISA检测显示基因转染组有明显基因表达;与空白组及PLNCX_2空载体转染组相比,双基因转染组IL-1Ra、TGF-β1、Ⅱ型胶原含量明显提高(P<0.05),IL-1Ra单基因转染组IL-1Ra含量提高明显,TGF-β1单基因转染组TGF-β1、Ⅱ型胶原含量提高明显;基因转染组软骨细胞位于S期的比例增高明显,与空白组比较差异有显著性(P<0.05)。 结论基因转染软骨细胞后可获得稳定表达,IL-1Ra+TGF-β1双基因转染的软骨细胞生物学活性优于两者中的任一单基因转染,为基因治疗骨关节炎的研究提供实验基础。第二部分联合基因转染治疗兔膝骨关节炎的研究 目的观察白细胞介素-1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)与转化生长因子-β1(TGF-β1)双基因转染在关节中的表达及对骨关节炎的治疗效果。 方法以逆转录病毒为载体,体外转染同种异体原代软骨细胞,将转染了外源基因的软骨细胞注射入兔膝关节腔。前交叉韧带切断法(ACLT)制成新西兰白兔膝关节OA模型,共30只,随机分为5组,Ⅰ组为空白对照组,Ⅱ组为手术对照组,Ⅲ组为IL-1Ra转染组,Ⅳ组为TGF-β1转染组,Ⅴ组为IL-1Ra和TGF-β1双基因转染组。外源基因注射后第4周与第8周,用PBS灌洗兔膝关节,ELISA分析转基因表达,硝酸还原法检测膝关节液中NO含量,取关节标本进行Mankin's评分,阿尔辛蓝-过碘酸雪夫试剂(AB-PAS)染色,TGF-β1、IL-1Ra及Ⅱ型胶原免疫组化、原位杂交检测。结果:ELISA检测显示在第4周基因转染组有明显的基因表达,第8周基因表达减弱;手术对照组软骨损伤程度最大,Mankin's评分明显高于其他组;TGF-β1、IL-1Ra及Ⅱ型胶原免疫组化染色,手术对照组灰度值低于其他组,单基因转染组灰度值低于双基因转染组,8周时各对应组灰度值较4周有明显下降。 结论以逆转录病毒为载体将转染了外源基因的软骨细胞转入骨关节炎关节内,可获得稳定的外源基因表达,TGF-β1和IL-1Ra可有效阻止OA的进一步发展,且联合基因治疗OA效果优于两者中任一单基因,外源基因表达具有时效性。
【学位授予单位】:山西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R684.3

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 马丽,郭万首,潘林,吴东海;白细胞介素-1受体拮抗蛋白间接体内转基因对骨关节炎软骨细胞凋亡的抑制作用[J];中华风湿病学杂志;2004年05期
2 向川;卫小春;杜靖远;翁习生;李鹏翠;丁娟;;双基因联合转染治疗兔膝骨关节炎的实验研究[J];中华风湿病学杂志;2007年08期
3 张晓玲;于长隆;毛泽斌;傅欣;张继英;;骨性关节炎的联合基因治疗研究[J];中国运动医学杂志;2006年01期
4 向川,卫小春,杜靖远;pcDNA3+转化生长因子-β1单独转染及其与pAT_(153)+胰岛素样生长因子-1共转染兔软骨细胞的研究[J];中华实验外科杂志;2005年10期
5 向川;杜靖远;翁习生;卫小春;;转化生长因子-β1基因和胰岛素样生长因子1基因联合转染治疗兔膝骨性关节炎的研究[J];中华实验外科杂志;2005年12期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 袁小洪;安荣泽;王兆杰;贾婀娜;;转化生长因子-β在软骨组织工程中的研究进展[J];安徽医学;2009年06期
2 钟政荣,王月华,刘凯,张凡,郑照军;血小板计数时报警信号分析[J];蚌埠医学院学报;2000年02期
3 余道军,钟政荣;非小红细胞对血小板计数结果影响分析[J];蚌埠医学院学报;2001年04期
4 许文龙,倪克明,张菁华,张国祥,张群威;血细胞分析仪检测网织红细胞三项参数正常值范围调查[J];蚌埠医学院学报;2003年06期
5 田利荣;徐晓丽;;131例EDTA-K_2诱导血小板聚集的原因分析[J];包头医学院学报;2008年06期
6 彭新国;李占全;;脐血及成人外周血淋巴细胞分化抗原和细胞因子表达能力的相关分析[J];滨州医学院学报;2007年01期
7 杨达山;张善第;;对51例全血细胞分析检查结果的回顾性分析[J];当代医学;2011年27期
8 张艳;;浅谈血浆的临床应用[J];当代医学;2012年14期
9 樊笑霞;吴飞;王凌;;EDTA-K_2对异型淋巴细胞检测的干扰[J];第二军医大学学报;2009年05期
10 袁宏,郑强;Sysmex SF-3000血液细胞分析仪血小板相关参数的测定及临床意义[J];大连医科大学学报;2000年02期
中国重要会议论文全文数据库 前7条
1 卢亮宇;王予彬;;膝骨关节炎疼痛机制及治疗的研究现状[A];第十七届中国内镜医师大会论文集[C];2007年
2 张大莲;吴惠玲;高晓玲;;静脉输注脂肪乳仪测血细胞多参数结果分析[A];玉溪市第八届检验医学学术年会暨科技成果推广会论文汇编[C];2005年
3 张大莲;孔繁林;吴惠玲;高晓玲;杨美兰;朱江贤;高翔;詹学良;李杰芬;;网织红细胞参数在贫血疾病诊断中的临床价值[A];玉溪市第九届医学检验学术年会暨科技成果推广会论文汇编[C];2008年
4 张大莲;孔繁林;吴惠玲;高晓玲;杨美兰;朱江贤;高翔;詹学良;李杰芬;;仪测网织红细胞分类与显微镜分类法的相关性分析[A];玉溪市第九届医学检验学术年会暨科技成果推广会论文汇编[C];2008年
5 杨宇溪;申志红;;血小板可逆聚集致血小板减少2例[A];玉溪市第九届医学检验学术年会暨科技成果推广会论文汇编[C];2008年
6 朱耀康;;田径运动员身体机能生化指标检测与评定[A];中国体育科学学会运动训练学分会第五届全国田径运动发展研究成果交流会论文集[C];2012年
7 于长隆;;运动创伤的基础研究[A];2006-2007体育科学学科发展报告[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 高静;胸腺五肽肺部吸入粉雾剂的研制及其药效学研究[D];第二军医大学;2005年
2 李海燕;腺伴随病毒介导的脑源性神经营养因子和神经营养素4对体外培养的大鼠视网膜神经节细胞转染的研究[D];中国协和医科大学;2005年
3 王博龙;氯化两面针碱体外抗肿瘤效应及其分子机制研究[D];广西医科大学;2007年
4 李墨林;化疗治愈肿瘤动物模型的建立及小剂量CTX抗肿瘤作用机制的研究[D];大连医科大学;2008年
5 刘乐;TAT-SOD在脑缺血再灌注损伤中对神经细胞凋亡的保护作用[D];第四军医大学;2008年
6 关雪峰;人类原发性膝关节骨性关节炎病变软骨全基因组表达与分析[D];辽宁中医药大学;2009年
7 何劼;可注射性纤维蛋白凝胶/脱钙骨基质复合支架修复兔膝关节软骨的实验研究[D];第二军医大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 侯朝凤;急性冠状动脉综合征临床预后危险因素分析[D];山西医科大学;2011年
2 陈孟交;丹紫康膝冲剂对兔膝骨性关节炎软骨水及羟脯氨酸影响的研究[D];湖南中医药大学;2011年
3 牟方政;复元胶囊对兔膝骨关节炎自由基代谢及软骨IGF-I/IGFBP-3的影响[D];重庆医科大学;2011年
4 李成;软骨源性形态发生蛋白缓释系统对兔膝骨关节炎影响的实验研究[D];辽宁医学院;2011年
5 李麒;活血化瘀法改善原发性支气管肺癌高凝状态的临床观察[D];山东中医药大学;2011年
6 樊志强;白细胞介素-1受体拮抗剂及转化生长因子β1对兔膝关节骨性关节炎的治疗研究[D];第四军医大学;2011年
7 徐宗;血当归粗提物体外成骨活性研究[D];中南民族大学;2011年
8 施捷;大细胞性贫血相关疾病的初步临床探讨[D];大连医科大学;2011年
9 朱红燕;两种胸腺五肽制剂的实验研究[D];浙江大学;2012年
10 胡永欣;间歇性低氧训练对红细胞生成及其抗氧化能力的影响[D];华南师范大学;2003年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 张晓玲,于长隆;骨关节炎基因治疗现状与前景[J];北京大学学报(医学版);2002年05期
2 彭丹,孙材江,周江南;一氧化氮在实验性骨关节炎软骨细胞凋亡中的作用[J];中华风湿病学杂志;2000年04期
3 马丽,吴东海;关节炎与基因治疗[J];中华风湿病学杂志;2001年04期
4 向川,杜靖远,卫小春;重组大鼠转化生长因子-β_1和胰岛素样生长因子-1基因转染兔软骨细胞及对其增生及合成的促进作用[J];中华风湿病学杂志;2003年11期
5 向川,杜靖远,翁习生,卫小春;重组大鼠pAT_(153)+IGF-1基因单独转染及其与pcDNA_3+TGF-β_1基因共同转染兔软骨细胞的实验研究[J];中华风湿病学杂志;2004年11期
6 陈建庭,金大地,杨德鸿,景宗森;转移生长因子-β、碱性成纤维细胞生长因子诱导人成骨细胞表达血小板衍生生长因子BmRNA的研究[J];中华实验外科杂志;2001年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 易诚青;杜靖远;郑启新;郭晓东;刘勇;刘建湘;;转化生长因子-β1转基因生物衍生型移植体修复骨缺损[J];中华实验外科杂志;2006年02期
2 宋之明;张绍坤;刘一;任琦;付长峰;;转基因同种异体组织工程软骨修复兔膝关节全层缺损[J];中国临床康复;2006年37期
3 段小红;江逊;何贤辉;郑德育;王晓燕;史剑波;许庚;崔鹏程;;IDO基因修饰的软骨细胞对T淋巴细胞增殖的影响[J];现代免疫学;2008年05期
4 李逸松;田卫东;李声伟;刘流;代晓明;;人白细胞介素-1受体拮抗剂基因转染人颞颌关节软骨细胞的基因表达[J];华西口腔医学杂志;2006年04期
5 段小红;何贤辉;崔鹏程;王晓燕;吴明明;史剑波;许庚;江逊;;脂质体介导pIDO-EGFP转染原代培养软骨细胞的初步研究[J];细胞与分子免疫学杂志;2007年12期
6 李进;郑东;杨述华;刘国辉;冯勇;傅德皓;梅荣成;唐欣;;生长转化因子-β3转染骨髓基质干细胞联合脱钙骨基质修复软骨缺损[J];中华实验外科杂志;2007年06期
7 夏万尧;丁文龙;刘伟;钟梅芳;王丹茹;周广东;崔磊;曹谊林;;重组hTGF-β_1基因转染骨髓间充质干细胞及其表达[J];上海交通大学学报(医学版);2007年10期
8 卢华定;蔡道章;马会慧;卢建溪;;重组人BMP-7真核表达质粒的构建及转染软骨细胞后的表达[J];中国矫形外科杂志;2006年11期
9 刘之川;邵增务;邓超;丁凡;郭兵;张宇坤;;生长分化因子5真核表达质粒转染小鼠骨髓基质干细胞体外诱导向软骨细胞分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年28期
10 吴江;基因强化组织工程的研究进展[J];生物医学工程学杂志;2003年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王季石;胡秀英;方琴;谢建琼;崔欣;;ALDH2基因转染对白血病细胞增殖与凋亡的影响[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
2 李硕;王波林;余孝其;;用于基因转染的可降解大环多胺聚合物的合成[A];大环化学和超分子化学的新发展——当前学科交叉的一个重要桥梁——中国化学会全国第十五届大环化学暨第七届超分子化学学术讨论会论文摘要集[C];2010年
3 贾向旭;张雪峰;袁丽珍;江国春;鲁茁壮;魏康;;p21基因转染提高了辐射抗性肿瘤细胞的辐射敏感性[A];中华医学会放射医学与防护学分会第二次中青年专题研讨会论文汇编[C];1999年
4 赵永波;王枫;李钰;;t-PA基因转染AGZY83-a细胞移植入小鼠体内的表达研究[A];第三届全国少数民族地区神经病学会论文汇编[C];2005年
5 张东山;刘伏友;陈香美;彭佑铭;;超声微泡系统介导基因转染大鼠肾脏的实验研究[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年
6 王书侠;陈芳芳;贾丽;赵晓琴;武建国;虞伟;李晓军;;人分化抑制因子3在A549/DDP细胞中的表达及作用[A];全国临床免疫检验研讨会暨第六届全国临床免疫学术会议论文汇编[C];2009年
7 贾赤宇;陈璧;;hTGFβ1基因转染对NIH3T3成纤维细胞体外增殖的影响研究[A];中华医学会第五次全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];1997年
8 李玮;谭建;方佩华;李宁;;人钠碘转运体基因转染胶质瘤细胞介导放射性碘治疗的体外研究[A];第四届中国核学会省市区“三核”论坛论文集[C];2007年
9 李慧武;戴尅戎;汤亭亭;严孟宁;郁朝锋;张晓玲;岳冰;楼觉人;;人骨形态发生蛋白-2基因转染脂肪源性间充质干细胞的成骨研究[A];2005年上海市生物医学工程学会学术年会论文集[C];2005年
10 郭亮;韩雅玲;闫承慧;郭鹏;邓捷;麦晓燕;;腺病毒介导E1A激活基因阻遏子基因转染抑制兔颈动脉球囊拉伤后新生内膜形成[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 保健时报特约记者 方序;体外“养”一块软骨补膝盖[N];保健时报;2011年
2 记者 邰举;韩用猪软骨细胞制成生物材料[N];科技日报;2008年
3 吴一福;西安交大:用人胎儿软骨细胞培养成功软骨组织工程种子细胞[N];中国医药报;2006年
4 陈如为;骨关节炎折磨千万人软骨细胞缺氧是元凶[N];医药经济报;2000年
5 于峰;哪些运动有助孩子长高[N];中国中医药报;2008年
6 徐亚静;上海两项自然科学基金项目通过鉴定[N];中国医药报;2005年
7 杨春;药物增高不可信[N];大众卫生报;2005年
8 姚乐;保护关节要趁年轻[N];农村医药报(汉);2008年
9 杜少辉;徐志伟;陈东风;牛珀至宝微丸能减轻内毒素休克肺损[N];中国医药报;2005年
10 阿基 牛剑 余志平 张贵华 风信 贵华 陆志城 朱明;生物疗法又有新花样[N];医药经济报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 曹毅;用基因打靶技术构建恶性疟原虫MSP1转基因鼠疟模型及其应用[D];第二军医大学;2005年
2 梁日生;转TrkC基因神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究[D];复旦大学;2005年
3 张瑞芬;金属硫蛋白与乳腺癌关系的研究[D];中国协和医科大学;1999年
4 周艳;乳腺癌ERβ表达的临床意义及其与他莫昔芬治疗耐药相关意义的初步研究[D];第三军医大学;2007年
5 欧雅莉;GDNF基因修饰脐血细胞并血脑屏障开放剂对高血压脑梗疗效的实验研究[D];中南大学;2009年
6 李晓强;转染VEGF165基因的内皮祖细胞移植治疗慢性深静脉血栓的实验研究[D];苏州大学;2008年
7 王艳梅;人VEGF_(165)转基因组织工程软骨的实验研究[D];中国协和医科大学;2009年
8 汪圣毅;腺病毒介导hIL-10基因转染联合IFN-γ抑制血管平滑肌细胞增殖及其机制的研究[D];复旦大学;2005年
9 王万宗;体外三维培养条件下转化生长因子β1基因转染的兔骨髓间充质干细胞促成软骨细胞分化的实验研究[D];第二军医大学;2006年
10 高振南;人肿瘤坏死因子-a基因转染对舌癌细胞生物学行为影响的实验研究[D];四川大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张辉;重组合异种骨复合VEGF基因转染骨髓间充质干细胞对兔非创伤性股骨头坏死修复的实验研究[D];兰州大学;2008年
2 李璐;逆转录病毒载体介导的IL-1Ra和TGF-β1联合基因转染治疗兔膝骨关节炎的研究[D];山西医科大学;2009年
3 刘君;逆转录病毒载体介导的IL-1Ra和TGF-β1联合体外转染兔软骨细胞表达的研究[D];山西医科大学;2008年
4 许杰;TGF-β1转基因牙龈成纤维细胞生物学特性及其胞内信号转导的初步研究[D];第四军医大学;2005年
5 赵静;脂质体介导转染的绿色荧光蛋白基因在骨髓基质细胞内表达[D];山东大学;2005年
6 骆书美;超声微泡介导pEGFP-N1转染人牙龈成纤维细胞的初步研究[D];重庆医科大学;2009年
7 姚珂;反义PNA抑制端粒酶活性对肺癌A549细胞影响的研究[D];第三军医大学;2004年
8 梁政;rAAV/AFP转染对人外周血单核细胞来源树突状细胞免疫刺激功能研究[D];第一军医大学;2005年
9 林桂渺;TIMP-3真核表达载体构建以及在前列腺癌细胞株中作用的研究[D];吉林大学;2006年
10 种瑞峰;p21~(waf1)基因转染对乳腺癌细胞增殖活性和中心体复制的影响[D];青岛大学;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026