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《山西医科大学》 2009年
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制备人源性TNF-α单克隆抗体治疗变应性鼻炎

田露芳  
【摘要】: 目的:制备可溶性的高效表达的人源TNF-α单克隆抗体,探讨该抗体在变应性鼻炎小鼠模型中的防治作用,以便进一步研究其生物学功能,预测临床应用前景。 方法:用已筛选获得的TNF-α抗体基因VH/K21为模板进行PCR扩增,产物与其表达质粒进行双酶切、连接后克隆进入PET22b(+)/BL21(DE3)感受态中并在该原核系统中实现可溶性表达;表达产物进行Western-bloting、ELISA鉴定,并对阳性克隆的中和活性进行初步研究。将24只6~8周BALB/c小鼠随机分为变应性鼻炎组(A组)、TNF-α抗体治疗组(B组)和正常对照组(C组),每组8只。A、B组以卵清白蛋白(OVA)致敏建立变应性鼻炎模型,B组每次激发前0.5 h以TNF-α抗体5μg滴鼻。比较各组小鼠变应性鼻炎症状评分、鼻黏膜嗜酸性粒细胞(EOS)计数。实验数据采用单因素方差分析。 结果:成功制备出可溶性的高效表达的人源TNF-α单克隆抗体。序列分析表明该克隆具有全新的人源TNF-α抗体基因,他可以特异识别人的TNF-α且对L929细胞具有细胞毒性中和作用。A、B、C组的症状评分分别为(7.625±1.061)、(0.875±0.835)和(0.375±0.518)分,A组与B、c组的差异均有统计学意义(P值均 0.01),B组与c组的差异无统计学意义(P 0.05)。A、B、C组的EOS计数分别为(9.125±1.553)、(1.500±0.926)和(0.500±0.756),A组与B、c组的差异均有统计学意义(P值均 0.01),B组与c组的差异无统计学意义(P 0.05)。 结论:制备的人源性TNF-α单克隆抗体可抑制小鼠的变应性鼻炎,它为变应性鼻炎的治疗提供了新方法和新思路,为进一步研制应用于临床的TNF-α人源抗体奠定了基础,也将为其他人源抗体的制备提供理论依据和技术基础。
【学位授予单位】:山西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R765.21

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