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抗肺癌治疗性基因疫苗的纯化工艺

杨晓玲  
【摘要】: 研究背景:肿瘤基因疫苗(即DNA疫苗)是近年来国内外研究的热点,它主要通过激活患者的自身免疫系统,以达到控制或清除肿瘤的目的。 研究目的:旨在建立抗肺癌重组基因疫苗的实验室制备工艺,并对该抗肺癌重组基因疫苗进行初步的质量控制及鉴定,为基因疫苗的免疫实验研究及规模化大生产奠定基础。 研究方法:(1)在真核表达质粒PVAX-1中插入NY-ESO-1及SSX-2基因片断,构建了真核重组质粒PVNY-ESO-1SSX-2。(2)将已构建好的治疗性肺癌重组DNA疫苗(PVNY-ESO-1SSX-2)转化大肠杆菌JM109。制备LB种子液,摇瓶培养,收集菌体,以碱裂解、回收等方法处理后得到质粒DNA的粗制品。(3)利用色谱原理,通过Sepharose 6 FF, Plasmid Select, DEAE Sepharose FF层析系统对其进行纯化,并按照FDA推荐的临床用DNA的质量监控标准,对纯化重组DNA疫苗进行质量控制及鉴定。 研究结果:(1)构建的共表达NY-ESO-1基因和SSX-2基因的真核重组质粒PVNY-ESO-1SSX-2经鉴定完全正确。(2)所获得的超螺旋质粒DNA,其A260与A280的比值介于1.85-1.92,其中环状DNA达93%以上,内毒素含量小于10EU/mg。经检测,纯化的质粒DNA疫苗中无RNA、菌体蛋白质、菌体基因组DNA、细菌内毒素等残留量。结果显示,五批终产品全面质量鉴定均符合有关质量标准。 研究结论:对重组的抗肺癌基因疫苗PVNY-ESO-1SSX-2经Sepharose 6 FF, Plasmid Select, DEAE Sepharose FF层析系统纯化的质粒DNA纯度高,符合FDA推荐的临床用质粒DNA的质量标准,为肿瘤基因疫苗的大规模生产奠定基础。


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