马钱子碱对再生障碍性贫血患者T细胞分泌功能及T-bet表达的影响

【摘要】： 马钱子碱对再生障碍性贫血患者T淋巴细胞分泌功能及T-bet表达的影响 目的通过观察不同浓度马钱子碱对再生障碍性贫血患者(简称再障)外周血T淋巴细胞分泌TNF-α、IFN-γ、IL-4的水平及T-bet mRNA表达的影响,探讨中药马钱子治疗再生障碍性贫血的作用机制。 方法再障患者及健康志愿者各10例。采集各研究对象外周血10ml,采用密度梯度离心法及免疫磁珠法分离、纯化外周血T淋巴细胞。获得的T淋巴细胞需进行活细胞计数及流式细胞仪纯度测定,活细胞比例及纯度均在95%以上者进入下一步实验。设健康志愿者T淋巴细胞为正常对照组,再障T淋巴细胞为实验组。正常对照组不作干预,将实验组T淋巴细胞随机分为四组,分别加入0ug/ml、100ug/ml、200ug／ml、400ug／ml浓度的马钱子碱进行干预(各组均加入终浓度为100ug／ml的PHA)。培养72h后,收集各组T淋巴细胞培养上清液,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其中TNF-α、IFN-γ及IL-4的水平；收集各组T淋巴细胞,提取RNA,采用逆转录—聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测各组T-bet mRNA的表达水平。 结果 1.与正常对照组相比,再障空白组T淋巴细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ的水平均明显增高,而IL-4水平则明显降低(p均0.01)；再障空白组T-bet mRNA表达水平显著高于正常对照组(p0.01)。 2.再障100ug/ml、200ug/ml、400ug／ml马钱子碱干预组TNF-α、IFN-γ水平较空白组均明显降低,差异均具统计学意义；且随着马钱子碱作用浓度的增高,TNF-α及IFN-γ水平均逐渐下降,各干预组间比较差别均具统计学意义,且TNF-α及IFN-γ均于400ug/ml组降至正常水平。 3.再障不同浓度马钱子碱干预组之间比较,IL-4水平无明显差异(p0.05)。 4.再障100ug/ml、200ug／ml、400ug/ml马钱子碱干预组T-bet mRNA表达水平较空白组明显降低(p均0.01)；与100ug/ml组相比,200ug/ml组、400ug／ml组T-bet mRNA表达水平均降低(p均0.01)；且200ug／ml组、400ug/ml组T-bet mRNA表达均降至正常水平。 5.再障T-bet mRNA表达水平与IFN-γ水平呈正相关(r=0.795,p0.01)。 结论 1.再障患者外周血T淋巴细胞分泌TNF-α、IFN-γ水平较正常人明显升高,而IL-4水平则明显降低。 2.再障患者外周血T淋巴细胞T-bet mRNA表达水平明显高于正常人。 3.马钱子碱可降低再障患者造血负调控因子TNF-α、IFN-γ的水平及转录因子T-betmRNA的表达水平,且作用呈剂量依赖性,其中,IFN-γ的产生可能主要由T-bet调控。 4.马钱子碱可能通过上述机制在再障的治疗过程中发挥作用,为马钱子的临床应用提供了科学依据。