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《山西医科大学》 2010年
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大鼠肌肉挫伤后金属硫蛋白1A、2A mRNA时序性表达

刘淑芳  
【摘要】: 目的:应用实时荧光定量PCR技术检测大鼠肌肉挫伤后骨骼肌金属硫蛋白1A、2AmRNA相对于管家基因核糖体蛋白L13mRNA的表达量,探寻其时序性表达规律,探讨其表达变化与损伤时间的关系,旨为法医学早期损伤时间的推断提供科学依据。 方法:选取健康SD大鼠60只,体重200g-250g。随机分成3组,包括:实验组(挫伤后0.5h、1h、6h、12h、18h、24h、30h、36h)、愈后组(挫伤后21d)和对照组,每个亚组6只。实验组和愈后组均实施麻醉、褪毛后,利用改进的自由落体装置,250g重力锤自150cm高度垂直自由落下,造成大鼠右后肢大腿内侧肌群挫伤。损伤后各时间点取挫伤处肌肉组织50mg,置于液氮中保存备用;对照组大鼠未打击造伤,其余处理与实验组及愈后组相同。以Promega公司的SV Total RNA Isolation System提取肌肉组织中的总RNA,逆转录合成cDNA第一条链,选取管家基因核糖体蛋白L13mRNA为参比基因,利用SYBR Green I嵌合荧光法实时定量PCR检测MT1A mRNA和MT2A mRNA随损伤时间延长的表达量。 结果:(1)大鼠骨骼肌挫伤后MT1A mRNA表达情况:挫伤后0.5h表达开始上调,18h达高峰为对照组的239倍,24小时下降为对照组的42倍,30小时再次升高达144倍,伤后21d其表达量仍为对照组的57倍。除0.5h外,其余各实验组MT1A mRNA表达量与对照组相比差异有统计学意义(P0.05);相邻各实验组间相比差异有统计学意义(P0.05)。 (2)大鼠骨骼肌挫伤后MT2A mRNA表达情况:挫伤后0.5h开始表达上调,18h达高峰为对照组的717倍,24小时下降为对照组的44倍,30小时再次升高达204倍,伤后21d其表达量仍为对照组的44倍。除0.5h外,其余各实验组MTIA mRNA表达量与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。相邻各实验组间相比差异有统计学意义(P0.05)。 (3)大鼠骨骼肌挫伤后MTIA mRNA和MT2A mRNA表达量虽然不一样,但两者表达趋势一致,均为先急剧升高后急剧下降,并都出现二次升高,且随后缓慢下降,至伤后21d仍保持较高水平。 结论:(1)大鼠肌肉挫伤后36h内MT1A mRNA和MT2A mRNA呈时序性表达趋势,与损伤时间有一定的关系,其时序性变化可望作为骨骼肌早期损伤时间推断的指标之一,服务于法医学实践。 (2) MT1A mRNA和MT2A mRNA表达趋势整体一致,说明两者在抗损伤应答中的反应机制及所起作用相同,两者协同作用促进损伤愈合。 (3) MT1A mRNA和MT2A mRNA在伤后21d表达量分别为对照组57倍和44倍,说明两者不仅在急性炎症期发挥抗损伤作用,在组织修复、重塑阶段也起着不可替代的生物学作用。
【学位授予单位】:山西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R685

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