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《山西医科大学》 2010年
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孕妇血浆中RASSF1A基因的检测及其在子痫前期中的定量分析

王健  
【摘要】: 目的:探讨应用TaqMan探针实时定量PCR技术检测孕妇血浆中微量胎源性Ras相关区域家族1A (ras association domain family 1A, RASSFIA)基因的可行性;对正常妊娠期间孕妇血浆中酶切前、后RASSFIA基因水平定量分析,且进一步证实酶切后RASSFIA基因具有胎儿DNA的性质,弥补遗传基因标志物的不足;探讨其含量变化在子痫前期中的应用价值。 方法:选择妊娠7-41周孕妇80例,其中妊娠早、中、晚期及子痫前期孕妇各20例(轻、重度各10例),另取20例健康未妊娠女性为阴性对照。提取血浆游离DNA,经两种甲基化敏感的限制性内切酶HinP1I和Hhal消化处理,去除非甲基化的RASSFIA序列,保留超甲基化RASSFIA序列。应用基于TaqMan探针的荧光定量PCR (FQ-PCR)技术测定血浆中酶切前、后RASSFIA基因的含量,分别代表总游离DNA和游离胎儿DNA水平。同时检测β肌动蛋白(β-actin)基因,确保酶的完全消化。 结果:(1)80例孕妇除3例早期孕妇外,其余均检出了酶切后RASSFIA基因,且最早可在妊娠7+3周检测出该基因;未妊娠对照组中酶切后均未检测到RASSFIA基因,检测孕妇血浆中超甲基化RASSFIA基因的灵敏度和特异度分别为96.25%和100%。(2)孕妇血浆中酶切后RASSFIA基因的含量随妊娠的进程逐渐增加,在妊娠期间,超甲基化RASSFIA基因的平均浓度在早期妊娠组为55.52拷贝/ml,中期妊娠组为112.46拷贝/ml,晚期妊娠组为557.50拷贝/ml,分别占酶切前总游离DNA的1.78%、2.91%、9.45%。(3)子痫前期组孕妇血浆中酶切后RASSFIA基因含量为正常同期妊娠组的3.72倍,且其水平变化与子痫前期病情的严重程度呈正相关。(4)10例正常晚期孕妇分娩后24小时均检测不到超甲基化RASSFIA基因,10例子痫前期孕妇分娩后24小时有8例仍能检测到该序列,在分娩后1周检测不到。结论:孕妇血浆中超甲基化RASSFIA基因具有游离胎儿DNA的性质,是一种胎儿特异性表观遗传学标记物;应用Taqman探针荧光定量PCR技术可以更简便、准确地检测孕妇血浆中微量胎源性RASSFIA序列的水平;孕妇血浆中超甲基化RASSFIA基因浓度变化与子痫前期的病情具有相关性,其含量的异常变化可以提示子痫前期-子痫的发生及预后,扩大了游离胎儿DNA在无创产前诊断中的应用范围。
【学位授予单位】:山西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R714.245

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