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《内蒙古大学》 2011年
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鸡胚不同组织细胞的体外培养及永生化

邰大鹏  
【摘要】:鸡胚永生化细胞系可用于病理学诊断、疫苗生产及其效力与安全性检测。鉴于目前国内还没有该细胞系的建立,本研究通过体外培养鸡胚不同的组织细胞,对其基本生物特性进行了测定,并采用物理、化学及细胞融合等方法,体外诱导鸡胚各组织细胞发生转化,建立鸡胚永生化细胞系。 研究中取鸡胚躯体来源细胞(Body Tissue Cells, BTC)、心脏来源细胞(Heart Tissue Cells, HTC),肺来源细胞(Lung Tissue Cells,LTC)进行体外培养及细胞冻存。对上述细胞的形态学特点、生长曲线、分裂指数、染色体核型等指标进行了综合分析。 采用刮除法和相差消化法,从上述三种组织细胞中分离纯化了以上相应组织细胞。纯化的细胞大小相近,形态相似,生长特性一致。用DAPi染色对分离纯化得到的细胞进行进一步的形态鉴定及支原体污染检测。用抗波形蛋白单克隆抗体、抗结蛋白单克隆抗体、抗角蛋白-19单克隆抗体对BTC、HTC、LTC细胞分别做了免疫组化鉴定,检测得出BTC为成纤维细胞、HTC为成肌细胞、LTC为上皮类细胞。 用MNNG、叠氮钠及紫外线诱导鸡胚不同组织的三、四代细胞,计算半致死剂量。筛选诱导后的细胞,并长期传代培养和冻存,其中有两株细胞(BTC、HTC)分别传代到第36代和29代。 探索不同分子量、不同浓度的PEG作融合剂对诱导癌细胞与鸡胚体细胞融合的最适条件,在HAT选择培养基下筛选融合细胞,得到杂交瘤细胞。对其进行克隆和传代培养后,杂交细胞生长速度明显提高。
【学位授予单位】:内蒙古大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S831;Q813.1

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