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《内蒙古大学》 2017年
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小分子化合物激活中间态细胞KMEG-prCs内源多能性基因表达的研究

崔荣  
【摘要】:本研究在前期实验研究中获得一种由四因子c-Myc,Klf4,E-cadherin,Glis1诱导的,形态、体外增殖和体内外分化能力类似于胚胎干细胞,但不具有嵌合能力的部分重编程细胞,KMEG-prCs。该细胞虽具有一定多能性,但oct4,sox2,nanog,AKP并不表达,且SSEA1只在部分细胞中被激活。经转录物组分析显示,KMEG-prCs处于重编程的中间状态。该细胞可以作为一个新的细胞模型来研究重编程过程中内源多能性信号网络激活的分子机制。本研究旨在利用KMEG-prCs细胞,筛选可激活该细胞中内源多能性基因表达的小分子化合物或组合,为进一步探讨内源多能性调控网络的激活和发现新的小分子化合物组合建立新的小分子诱导体系奠定理论和技术基础。通过流式细胞分析显示,重编程不同阶段的表面标记蛋白Thy1(CD90)完全下调,CD54(ICAM-1)完全上调,CD44和SSEA1分别部分上调,CD31仅少数上调。结合转录物组的分析,进一步确定KMEG-prCs是一个处于重编程中段的中间态细胞。分选获得SSEA1+KMEG-prCs和SSEA1-KMEG-prCs,并用含有不同小分子化合物的培养液进行培养,内源多能性基因激活显示,加入HDAC抑制剂TSA、VPA、Oct4激活剂(OAC1)与腺苷酸环化酶活化剂(Forskolin)后激活了多能性基因AKP的表达,并且使一部分SSEA1阴性细胞转变为SSEA1阳性细胞。随后加入EZH2蛋白胞内增强子抑制剂(DZNeP)进一步诱导后,在小分子组合PCA+FD处理下,SSEA1+KMEG-prCs 和 SSEA1-KMEG-prCs 内源 oct4 均被激活,SSEA1+KMEG-prCs中oct4高水平表达。获得了一个新的细胞状态,KMEG-prCs-O+,该细胞仍然保持体内外分化能力。随后,虽然将PCA+FD中的A-83-01替换为E-616452,并联合LiCl,构成PCE+FD+Li小分子化合物组合可有效激活nanog的表达,但oct4的表达被下调。综上所述,KMEG-prCs是一个处于重编程中段的中间态细胞,通过小分子化合物的处理其内源多能性调控网络可以被激活。该研究为探讨小分子化合物对重编程的作用机理以及进一步获得完全重编程的iPSCs奠定了基础,同样对于细胞在重编程过程中信号通路,代谢途径,表观遗传修饰等的研究提供依据。
【学位授予单位】:内蒙古大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:Q23

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 ;Induced pluripotent stem cells(iPSCs)——a new era of reprogramming[J];遗传学报;2010年07期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 许士俊;穆军升;张建群;伯平;;三维膜对小鼠诱导多能干细胞体外培养效果的影响[J];中华心血管病杂志;2015年12期
2 Alexander E Berezin;;Diabetes mellitus and cellular replacement therapy: Expected clinical potential and perspectives[J];World Journal of Diabetes;2014年06期
3 ;Editorial[J];遗传学报;2012年01期
4 闫益波;张艳丽;齐巍巍;万永杰;樊懿萱;王锋;;猪诱导性多能干细胞技术的研究进展及应用前景[J];遗传;2011年04期
5 陈超;肖世富;;诱导多能干细胞与神经退行性疾病(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2011年02期
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