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《内蒙古大学》 2017年
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大肠杆菌DsrA-sRNA和oriC转录对DNA复制起始的影响

朱伟伟  
【摘要】:细菌sRNA(small noncoding RNA)广泛参与细菌生命活动,包括基因表达、代谢以及应激反应,但仍未见sRNA对DNA复制起始影响的系统研究。经过敲除11种sRNA并分析所得突变体,发现大肠杆菌DsrA-sRNA影响DNA复制起始,是个复制起始负调控因子。DsrA-sRNA与dnaA-mRNA可能有相互作用,但这种相互作用并未影响DnaA的表达。然而,qPCR实验说明DsrA-sRNA过表达提升rpoS、dps、hchA、cbpA和yiaG基因的表达,敲除dsrd降低dps基因的表达,而Dps的表达会阻止DNA复制起始。另外,细菌双杂交实验证实HchA与Dps蛋白有相互作用,而HchA与DnaA蛋白没有相互作用。有趣的是,△dps细胞中过表达DsrA-sRNA促进DNA复制起始,与在野生型细胞中过表达DsrA-sRNA的效果相反。△hchA细胞中过表达DsrA-sRNA仍然抑制复制起始。综上所述,DsrA-sRNA对复制起始的抑制作用是通过Dps来实现的,然而,缺失Dps时,DsrA-sRNA以别的途径影响复制起始。复制原点附近基因穿越oriC的转录是复制起始必须的。为了探讨oriC转录对复制起始的作用机制,把PBAD启动子插入在染色体oriC右侧,其转录能够穿越oriC,构建了 WT-PBAD、△dksA-PBAD和△mfd-PBAD菌株。经流式细胞仪分析发现阿拉伯糖的加入并不影响WT-PBAD细胞的复制起始;阿拉伯糖诱导对△dksA-PBAD细胞的复制起始的影响依赖于营养,在LB培养基中AdksA-PBAD细胞的复制起始频率明显高于△dksA细胞,阿拉伯糖的加入进一步提高其复制起始频率。因此,oriC转录的确促进染色体复制起始,但其作用由DksA活性来调节。
【学位授予单位】:内蒙古大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:Q75

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