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《内蒙古大学》 2005年
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转基因克隆法制作人胰岛素原牛乳腺生物反应器的研究

杨东山  
【摘要】:显微注射法的高成本、低效率长期以来制约着转基因动物研究的发展,体细胞核移植技术的出现为转基因动物的制作提供了新的思路。转基因克隆技术使用预先筛选的基因修饰细胞作为核供体,可以大大提高转基因动物的制作效率,因此这一技术一经出现就受到广泛关注,成为研究热点。理论上所有的转基因克隆动物后代都是转基因动物,但事实并非如此,许多研究表明,利用该方法培育的克隆动物后代中转基因阳性率从0%到100%都存在。本研究试图通过转基因克隆的方法制作牛乳腺生物反应器,采用绿色荧光蛋白基因和新霉素抗性基因两个标记基因与人胰岛素原乳腺特异表达载体一起构建了可以在细胞和胚胎阶段进行双重筛选的转基因载体,并转染体外培养的牛胎儿成纤维细胞,经G418筛选后选择绿色荧光阳性细胞为核供体,制作克隆胚胎,进一步筛选绿色荧光阳性囊胚进行胚胎移植,通过三次筛选以避免非转基因胚胎用于移植,节约受体动物,提高转基因克隆的效率,最终得到了妊娠的结果。 1.转基因载体的构建: 将以牛α-乳白蛋白基因启动子指导人胰岛素原基因乳腺特异表达的载体p0.8-IS用酶HindⅢ和KpnⅠ切开后回收2.18kb的片段,连入pGEM-7zf(+)载体的MCS中,得到载体p7Z-IS;从载体pIRES2-EGFP上PCR得到Neo~r基因并在其两端引入NheⅠ和BamHⅠ两个酶切位点,将其插入pIRES2-EGFP的MCS中,
【学位授予单位】:内蒙古大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q789

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 张艳丽;转基因克隆法制作人溶酶体β-葡萄糖苷酶奶山羊乳腺生物反应器的研究[D];南京农业大学;2010年
2 刘凤军;优化核移植方案并生产转hLF基因山羊的研究[D];西北农林科技大学;2007年
3 丁向彬;牛体细胞核移植胚胎表观遗传修饰研究[D];西北农林科技大学;2008年
4 张玉玲;人—山羊异质胚胎构建及胚胎干细胞的分离培养[D];西北农林科技大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 王玲玲;绒山羊—牛异种核移植胚胎的构建及其组蛋白乙酰化修饰的研究[D];内蒙古大学;2008年
2 曹泽磊;BCB染色法筛选牛卵母细胞的初探[D];西北农林科技大学;2009年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前3条
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3 李海燕;韩萍;穆楠;;动物转基因技术在牛育种中的应用[A];第三届中国牛业发展大会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张艳丽;转基因克隆法制作人溶酶体β-葡萄糖苷酶奶山羊乳腺生物反应器的研究[D];南京农业大学;2010年
2 张红平;采用mtDNA序列研究中国家养山羊的遗传多样性与起源分化[D];四川农业大学;2003年
3 雷初朝;中国四个畜种(黄牛、水牛、牦牛、家驴)线粒体DNA遗传多样性研究[D];西北农林科技大学;2002年
4 金光辉;pEgr-IL18-B7.1双基因联合辐射抗肿瘤作用及其机制的探讨[D];吉林大学;2004年
5 马玉珍;用绿色荧光蛋白和肝再生增强因子基因进行转基因绵羊胚胎的研究[D];内蒙古大学;2004年
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7 雷安民;山羊-牛异种细胞核移植研究[D];西北农林科技大学;2004年
8 杨巍;pEgr-IFNγ-Endostatin双基因-放射治疗的抑瘤效应及机制的研究[D];吉林大学;2005年
9 关勇;基因增强组织工程化尿道的实验研究[D];天津医科大学;2006年
10 杨建征;pEgr-IL18-B7.2双基因联合辐射抗肿瘤作用及其机制的探讨[D];吉林大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 谭贝贝;转基因克隆牛外源基因整合位点及拷贝数研究[D];河北农业大学;2012年
2 祁学斌;甘肃牦牛乳蛋白遗传多样性的研究[D];甘肃农业大学;2000年
3 袁建霞;安哥拉山羊与本地山羊的染色体研究[D];山西农业大学;2001年
4 姬爱国;八个绵羊种群的染色体研究[D];山西农业大学;2004年
5 郭瑜;牛成纤维细胞库的建立及生物学特性研究[D];四川农业大学;2005年
6 闫志军;嗜热菌糖苷酶基因牛乳腺特异表达载体的构建及脂质体介导其转染细胞的研究[D];内蒙古农业大学;2006年
7 肖红卫;精子介导转CD59和MCP双基因小鼠和猪的研究[D];西北农林科技大学;2006年
8 蒋泓;奶牛rRNA基因的克隆及多位点基因打靶载体的构建[D];暨南大学;2006年
9 李德宏;高原牦牛睾丸的形态学研究[D];甘肃农业大学;2007年
10 赵捷;骡鸭(番鸭(?)×高邮鸭♀)分子细胞遗传学研究[D];扬州大学;2007年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 童第周,叶毓芬;细胞核的移植[J];动物学报;1963年01期
2 童第周,叶毓芬,陆德裕,童夙明,杜淼;鱼类不同亚科间的细胞核移植[J];动物学报;1973年03期
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10 李光鹏,兰国成,刘莹,于元松,孙兴参,马所峰,谭景和;鼠猪异种细胞核移植[J];动物学研究;2000年05期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
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2 李裕强;绵羊-牛种间体细胞核移植研究[D];西北农林科技大学;2001年
3 武浩;小鼠-山羊交互异种核移植研究[D];西北农林科技大学;2004年
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7 舒建洪;转t-PA基因牛胎儿成纤维细胞系的建立及转基因牛克隆胚的构建[D];西北农林科技大学;2007年
8 刘凤军;优化核移植方案并生产转hLF基因山羊的研究[D];西北农林科技大学;2007年
9 丁向彬;牛体细胞核移植胚胎表观遗传修饰研究[D];西北农林科技大学;2008年
10 潘晓燕;盘羊—绵羊异种核移植技术程序的优化研究[D];南京农业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前4条
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2 申艳丽;张华林;陈世林;吴琰;杨利国;;DNA甲基化对早期胚胎发育的影响[J];畜牧与饲料科学;2011年11期
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中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 梁素丽;牛体细胞核移植重编程研究[D];西北农林科技大学;2011年
2 张艳丽;转基因克隆法制作人溶酶体β-葡萄糖苷酶奶山羊乳腺生物反应器的研究[D];南京农业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 柴磊磊;丁酸钠处理对奶牛成纤维细胞周期、活性、凋亡和组蛋白乙酰化的影响[D];华中农业大学;2010年
2 齐巍巍;转IRF-1基因牛胎儿成纤维细胞的BVDV及IBRV抗性研究[D];南京农业大学;2011年
3 李凤珍;5-氮-2-脱氧胞苷对牛成纤维细胞周期、染色体和凋亡的影响[D];华中农业大学;2009年
4 申艳丽;牛克隆胚发育相关基因启动子区DNA甲基化模式比较研究[D];华中农业大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
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【相似文献】
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1 刘芝;;生物反应器方兴未艾[J];科技潮;2001年07期
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10 武婕,陈惠鹏,王清明;用噬菌体展示六肽库筛选与G-CSF具有结合活性的小分子多肽[J];细胞与分子免疫学杂志;2001年03期
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1 杨东山;海棠;杜晨光;旭日干;;转基因克隆法制作牛乳腺生物反应器[A];第十届全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2005年
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3 吴清;张永强;杜守颖;;止痛贴膏处方中渗透促进剂的筛选[A];中华中医药学会第九届制剂学术研讨会论文汇编[C];2008年
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7 佟星;吴宝美;赵波;叶剑;刘红霞;曾潮武;濮绍京;万平;;小豆突变体库构建及突变体筛选[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
8 段秀梅;高晓蓉;吕军;安利佳;;解磷细菌的筛选、双抗药性突变及培养[A];第五届全国环境化学大会摘要集[C];2009年
9 汪茜;胡春锦;柯仿钢;黄思良;;柑橘炭疽病菌生防微生物的筛选与鉴定[A];中国植物病理学会2009年学术年会论文集[C];2009年
10 刘伟;鞠美庭;林慧;石英琳;;生态工业园评价指标体系与评价方法研究[A];中国环境保护优秀论文精选[C];2006年
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1 记者 修国华;利用动物乳腺生物反应器获抗凝血酶药品成功[N];经济参考报;2008年
2 本报记者 郑千里;推进动物乳腺生物反应器产业化[N];科技日报;2001年
3 本报记者 王建高 本报通讯员 刘志峰 孙景军 李慧 宋娜;拆除“篱笆”带来的不止是“同城效应”[N];科技日报;2008年
4 通讯员 李璐 记者 王建高;我国成功获得经纯化的抗凝血酶Ⅲ蛋白[N];科技日报;2009年
5 本报记者 许琦敏;他总是见人所未见[N];文汇报;2010年
6 北京市神经外科研究所 北京天坛医院 王忠诚院士;神经修复的生力军——神经干细胞[N];健康报;2008年
7 王言贵;新世纪人类将用什么药[N];福建科技报;2000年
8 刘汉权;新世纪将用什么药[N];中国中医药报;2001年
9 本报记者 王建高 特约记者 郑晓伟;让中国对虾“跳”上百姓餐桌[N];科技日报;2005年
10 本报记者 张子倩;青岛生物制药自主创新取得重大进展[N];青岛日报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨东山;转基因克隆法制作人胰岛素原牛乳腺生物反应器的研究[D];内蒙古大学;2005年
2 兰丽珍;逆转录病毒介导人胰岛素原突变基因转染肝细胞分泌成熟胰岛素的实验研究[D];重庆医科大学;2004年
3 张艳丽;转基因克隆法制作人溶酶体β-葡萄糖苷酶奶山羊乳腺生物反应器的研究[D];南京农业大学;2010年
4 王宁;精原干细胞途径建立hFIX转基因小鼠及Flt3配基乳腺生物反应器研究[D];复旦大学;2003年
5 阎松;mRNA体外展示技术筛选胸苷酸合成酶RNA亲和肽的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
6 史秀娟;野黄芩素对基质金属蛋白酶抑制机理的研究[D];吉林大学;2009年
7 李志刚;不同磷效率基因型大豆的筛选及其对磷素水平的反应机理研究[D];沈阳农业大学;2004年
8 申海清;抗IBDV中药筛选、作用机制及其临床应用研究[D];吉林大学;2005年
9 尤希凤;光合产氢菌群的筛选及其利用猪粪污水产氢因素的研究[D];河南农业大学;2005年
10 周志春;马尾松优质纸材选择及其生态遗传学研究[D];南京林业大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 朱明月;肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)基因的改造及其在毕赤氏酵母菌中的表达分析[D];华南热带农业大学;2005年
2 肖美秀;水稻抗Cd胁迫的种质资源筛选及其生理生化特性研究[D];福建农林大学;2005年
3 敖晓琳;川西高原牧区自然发酵酸乳中优良酸乳发酵剂菌株的筛选[D];四川农业大学;2005年
4 韩卫杰;肉用绵羊杂交组合筛选及胴体分割方法的研究[D];西北农林科技大学;2005年
5 陈志芳;新杀虫微生物资源筛选利用研究[D];南京师范大学;2005年
6 贾建慧;产微生物絮凝剂优良菌的筛选及絮凝特性研究[D];西安建筑科技大学;2006年
7 吴军;肌红蛋白短肽亲和配体的肽库筛选[D];吉林大学;2006年
8 王贤波;催化合成茶氨酸的菌株筛选与重组菌的构建[D];中国农业科学院;2006年
9 王利敏;弹性蛋白酶菌株选育及其发酵条件初步研究[D];郑州大学;2006年
10 李怀波;荧光假单胞菌P13的筛选及拮抗油菜菌核病菌的研究[D];上海师范大学;2006年
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