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甜瓜耐贮藏基因工程研究

哈斯阿古拉  
【摘要】:以甜瓜品种河套蜜瓜(Cucumis melo L. cv Hetao)成熟果实RNA为模板,分别经反转录合成和PCR扩增得到编码ACC合成酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid synthase, ACS)、ACC氧化酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase, ACO)和多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase, PG)基因cDNA,将其分别克隆于pUC19质粒中获得重组质粒。三个基因cDNA长分别为627bp、545bp和1183 bp。与已报道的甜瓜ACS基因、ACO基因和PG基因cDNA相应序列比较同源性很高。 Cucumisin是甜瓜类枯草杆菌丝氨酸蛋白酶,其表达具有果实特异性。本文应用PCR方法从甜瓜基因组DNA中扩增出该基因自转录起始位点至上游一段长310bp片段,并将其克隆到pUC19载体中,序列分析表明该序列与已报道的相应序列完全相同,且具有TATA-box、CAAT-box、G-box和I-box-like等功能域,具有典型的果实特异性启动子特征。成功获得甜瓜果实特异性表达基因的启动子,为下一步实现外源基因在甜瓜果实中特异表达奠定基础。 为建立甜瓜简便易行转化频率高的转基因技术,以甜瓜(Cucumis melo L.)品种河套蜜瓜为受体材料,以含gus基因的植物双元表达载体pPZP221为外源基因供体,进行了花粉管通道法转基因研究。自交授粉后分别于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10小时,切去柱头上半部分,并立即滴加供体DNA溶液,果实成熟后收获转化种子。对T_0代植株进行PCR检测,结果表明不同时间处理所得到的T_0代植株均具有较高的转化频率,其中授粉后7h滴加DNA


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