促微丝聚合剂Jasplakinolide对牛卵母细胞减数分裂和早期胚胎发育的影响

【摘要】： Jasplakinolide(JAS)是一种促进微丝聚合和稳定的药物,是研究细胞有丝分裂器形成与变化的重要手段。有关JAS对哺乳动物卵母细胞减数分裂的影响报道极少。本研究在牛卵母细胞成熟培养过程中用JAS进行处理,分析了JAS对减数分裂过程中细胞骨架形态、染色体的排列分离、卵母细胞的孤雌发育和体细胞克隆胚胎的发育等的影响做了研究。 一、JAS对牛卵母细胞减数分裂成熟的影响 1.牛卵母细胞体外成熟过程中用不同浓度的JAS处理,成熟率随着药物浓度(100nM、200nM、300nM和400nM)的增加而降低(70.3%、53.1%、39.7%和20.6%)。 2.在成熟培养前期加入JAS处理后显著影响卵母细胞的成熟与结构形态,但在培养的后期加入JAS则对卵母细胞的成熟没有影响。 3.JAS对牛卵母细胞减数分裂过程中的细胞骨架动态变化产生了影响。纺锤体微管的形态发生了改变,出现了两个纺锤体、巨大纺锤体和多极纺锤体等异常结构。400nM浓度成熟培养16h、20h和24h,异常卵母细胞比率较高,分别为71.8%、72.8%和64.0%。微丝的正常分布也受到影响,微丝不规则的分布在卵母细胞的各个时期。 4.JAS对染色体的排列和分离产生了影响。IVM 24h出现了多倍体现象,并且随着药物浓度(200nM、300nM和400nM)的增加而增加(19.6%、40.4%和55.3%)。未排第一极体的卵中四分体卵母细胞较多,尤其在200nM和300nM时分别为91.9%和100%。从染色体图片可以看到存在同源染色体分离不完全现象。 二、JAS处理牛卵母细胞对胚胎发育的影响 1.经JAS处理后的卵母细胞,其孤雌发育受到了影响。在含200nM和400nMJAS的成熟培养液中培养的卵母细胞排出pb1后孤雌激活培养,卵裂率和囊胚率均低于对照组。而经400nM JAS处理的未排pb1的卵母细胞的卵裂率(71.9%)显著高于200nM JAS组(55.7%),但囊胚率无明显差异(p＞0.05)。 2.JAS处理后的卵母细胞的克隆胚发育率受到了影响。100nM处理后的卵母细胞克隆胚的卵裂率(76.9%)与对照组(73.4%)无显著性差异,但是囊胚率(16.9%)明显低于对照组(39.9%),差异显著(p＜0.01)。