用无载体无选择标记反义Cm-ACO1基因转化甜瓜品种河套蜜瓜的研究

【摘要】：摘要 本实验以植物双元表达载体pPZP221(35S-nos)为构建的最初载体,通过MssI、VspI双酶切去除植物选择标记庆大霉素aacCl (gentamycin acetyltransferase gene)抗性基因,并在该位点重新插入CaMV 35S启动子和nos终止子序列,获得无选择标记载体pPZP201 (35S-nos)。将ACC氧化酶(ACO1)基因cDNA编码区709 bp核苷酸序列反向构建到pPZP201 (35S-nos)载体,得到载体pPZP201-ACO1。PsyⅠ、PaeⅠ双酶切载体pPZP201-ACO1,获得无植物选择标记基因无载体骨架序列的35S-ACO1-nos线性表达盒。通过花粉管导入法转基因技术将表达盒DNA片段导入受体材料河套蜜瓜中,经选育获得了T1代转基因耐贮藏品系。 实验结果如下： 1)导入20朵花,收获18颗果实,通过PCR检测发现,有4颗果实中的T0代种子的阳性率较高。 2)经连续两代田间筛选,获得表现为耐贮特性的4个耐贮藏株系。耐贮藏株系的T0、T1代果实贮藏到30d时,其果实硬度平均值分别为4.9 kg/cm2、4.95kg／cm2,而非转基因河套蜜瓜已经腐烂。折光糖测定指标表明转基因河套蜜瓜T0、T1代果实与非转基因河套蜜瓜无明显差别。T0、T1代果实内源乙烯含量为非转基因河套蜜瓜的3%-4%。 3)对具有耐贮特性的T1代河套蜜瓜的蔓粗、蔓长和叶片大小进行分析,结果显示转反义ACO1基因河套蜜瓜与非转基因河套蜜瓜没有显著性差异,表明反义ACO1基因并未对河套蜜瓜的生长产生显著性影响。 4)对T2代转反义ACO1基因河套蜜瓜花特性的研究表明,转基因河套蜜瓜与非转基因河套蜜瓜在花粉形态、花粉萌发特性上差异不大。转基因河套蜜瓜两性花着生节位(11节)高于非转基因河套蜜瓜两性花着生节位(8节)。转基因河套蜜瓜花梗在离体条件下表现出延迟脱落的现象。与非转基因河套蜜瓜相比,花梗脱落延迟0.4天。