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《内蒙古工业大学》 2007年
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禽脑脊髓炎病毒VP1、VP3、VP0基因pcDNA4/HisMax表达载体的构建

王嘉慧  
【摘要】: 禽脑脊髓炎病毒(Avian Encephalomyelitis Virus, AEV)是一种小RNA病毒。侵害鸡的中枢神经系统和其他实质性器官,该病通过口-粪途径传播,具有水平和垂直传播的能力。由于它极大的稳定性,被污染的区域可能长期保持传染性。幼鸡感染该病毒后,引起麻痹、头颈震颤甚至共济失调,而成鸡常呈亚临床感染或导致产蛋量和孵化率下降。病毒的感染性不受氯仿、低PH、胃蛋白酶、胰酶和脱氧核糖核酸酶的影响,镁离子可增强病毒对热的稳定性,病毒的浮密度为1.31g/ml,直径为22-30nm,该病毒主要在鸡胚中增殖,在大多数细胞培养物中不生长。 本研究共分两个部分:第一部分为禽脑脊髓炎病毒VP1、VP3、VP0基因pUCm-T克隆载体的构建。用AEV接种SPF种蛋,同时设立不接毒组的空白对照组,用1:5倍稀释的AEV-NH937株和阴性对照PBS分别经卵黄囊接种于6日龄SPF鸡胚,继续孵化10天后,在无菌条件下分别采集接毒组和对照组的鸡胚胚脑和肠道。比较接毒组和对照组鸡胚的大小,结果显示,对照组鸡胚明显大于接毒组。根据AEV-NH937基因组全序列,设计三对引物,应用RT-PCR方法,扩增出AEV的外壳蛋白VP1、VP3、VP0基因。把它们克隆于pUCm-T载体上,然后进行序列分析,测序结果显示,AEV-NH937毒株VP1基因全长810bp,编码270个氨基酸,VP3基因全长735bp,编码245个氨基酸,VP0基因全长726bp,编码242个氨基酸;和Calnek疫苗株相比,AEV-NH937株VP1、VP3、VP0基因的核苷酸同源性分别为90.62%、93.88%、95.45%,氨基酸同源性分别为88.89%、97.96%、98.35%;第二部分是禽脑脊髓炎病毒VP1、VP3、VP0基因pcDNA4/Hismax表达载体的构建。用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ对阳性克隆质粒进行酶切,再用DNA凝胶回收试剂盒回收目的VP1、VP3、VP0片段。将VP1、VP3、VP0基因插入载体pcDNA4/Hismax构建表达重组质粒,然后转化大肠杆菌DH5α。经测序确定重组质粒pcDNA4/HisMax-VP1、pcDNA4/HisMax-VP3及pcDNA4/HisMax-VP0构建成功。本研究旨在为AEV核酸疫苗的研究提供初步的物质基础。
【学位授予单位】:内蒙古工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S852.65

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【参考文献】
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