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《内蒙古农业大学》 2010年
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t10,c12-CLA对猪皮下和背最长肌脂肪沉积的差异性调控机理研究

杜瑞平  
【摘要】:本论文采用皮下脂肪和背最长肌组织块培养及前脂肪细胞培养、细胞生物学及分子生物学等技术手段,系统研究了t10,c12-CLA对猪皮下和背最长肌组织脂肪沉积影响的生物学机制。研究共分三个部分: 1.本试验首先建立了30日龄猪皮下脂肪和背最长肌组织块培养及皮下和肌内前脂肪细胞体外培养体系,共设2个处理,处理1为阴性对照(添加0.1 mmol/LBSA),处理2添加100μmol/L的t10,c12-CLA,每个处理设6个平行,接种时即加入BSA与t10,c12-CLA进行处理至第10天。试验全期通过MTT法(采用上述前脂肪细胞培养体系)、GPDH活性检测及油红0染色技术(采用上述组织块培养体系)探讨了t10,c12-CLA对皮下和肌内脂肪前体细胞增殖与分化的影响。结果表明:(1)本试验中,100μmol/L t10,c12-CLA显著抑制了猪皮下脂肪前体细胞增殖,但对肌内脂肪前体细胞的增殖影响并不显著;(2)100μmol/L t10,c12-CLA显著抑制了猪皮下脂肪前体细胞分化,显著促进了肌内脂肪前体细胞的分化(P0.05);(3)本部分结果说明t10,c12-CLA对猪皮下和肌内脂肪前体细胞增殖与分化存在差异调控作用。 2.本试验猪皮下脂肪和背最长肌组织块体外培养及处理设计同第一部分,采用荧光定量PCR技术、酶活性测定及ELISA测定研究t10,c12-CLA对猪皮下和肌内前脂肪细胞分化关键转录因子、脂类代谢关键酶及调控激素、脂肪合成与分解速率的影响。结果表明:(1)本试验中,100μmol/L t10,c12-CLA显著提高了猪背最长肌的脂肪合成速率与猪皮下脂肪的脂肪分解速率(P0.05),而背最长肌的脂肪分解速率与皮下脂肪的脂肪合成速率对照组与处理组差异并不显著(P0.05)。同时100μmol/L t10,c12-CLA显著降低了猪皮下脂肪TG含量并提高了猪背最长肌的TG含量(P0.05);(2)100μmol/L t10,c12-CLA显著抑制了猪皮下脂肪PPARγ、FAS、INSR与背最长肌HSL和LPL的基因表达,促进了猪皮下脂肪HSL和背最长肌PPARγ、ADD1、INSR的基因表达(P0.05);(3)100μmol/L t10,c12-CLA显著降低了猪皮下脂肪HSL与背最长肌LPL活性及皮下INSR与肌内GHR蛋白表达水平,并提高了背最长肌ME活性和INSR蛋白表达水平(P0.05);(4)本部分研究结果从分化转录因子、代谢酶类与调控激素及脂肪合成与降解速率方面揭示了t10,c12-CLA对猪皮下和背最长肌组织脂肪沉积的差异性调控机制,进一步证实了t10,c12-CLA抑制猪皮下脂肪沉积同时提高肌内脂肪含量。 3.本试验猪皮下脂肪和背最长肌组织块体外培养及处理设计同第一部分,通过荧光定量PCR技术和ELISA方法研究t10,c12-CLA对肌肉—脂肪轴共调节细胞因子的影响。结果表明:(1)本试验中,100μmol/L t10,c12-CLA显著降低了猪背最长肌TNF-a、瘦素及IL-15的基因表达,并提高了猪皮下脂肪TNF-a、IL-6、瘦素与背最长肌脂联素、MSTN的基因表达水平(P0.05);(2)猪皮下脂肪TNF-a的t10,c12-CLA处理组与对照组的蛋白表达水平无显著差异,而皮下脂肪IGF-1的t10,c12-CLA处理组蛋白表达水平显著降低(P0.05),其它因子变化规律与基因表达变化规律一致;(3)本部分研究结果揭示t10,c12-CLA很可能通过TNF-a、瘦素、脂联素、IL-15及IL-6这些细胞因子的介导从而发挥了对猪皮下脂肪和肌内脂肪的差异性调控作用,进一步证实TNF-a、瘦素、脂联素、IL-15及IL-6在脂肪细胞和肌细胞间的分子对话中发挥着重要作用。 全文总体结论如下:(1)本研究条件下,l00μmol/L t10,c12-CLA通过上调或下调猪皮下脂肪和背最长肌内部分关键转录因子(PPARν、ADD1)、脂肪代谢酶(LPL、HSL)与激素受体(INSR),脂肪合成与分解速率,细胞因子(leptin、TNF-a等)的基因表达和蛋白水平,进而抑制猪皮下前脂肪细胞增殖与分化并促进了猪背最长肌前脂肪细胞的分化(P0.05),最终降低了猪皮下脂肪沉积并提高了背最长肌的肌内脂肪含量。(2)本研究结果初步表明TNF-a、瘦素、脂联素、IL-15及IL-6在脂肪组织和肌肉组织之间的分子对话中发挥着重要作用,进一步揭示t10, c12-CLA很可能通过TNF-a、瘦素、脂联素、IL-15及IL-6这些细胞因子的介导从而发挥了对猪皮下脂肪和背最长肌组织脂肪沉积的差异性调控作用。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S828

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【参考文献】
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