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《内蒙古农业大学》 2011年
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犬布氏杆菌分离鉴定及omp25基因分析

狄栋栋  
【摘要】:本研究采用虎红平板凝集试验和OIE标准间接酶联免疫吸附试验初筛,试管凝集试验复核,对我国部分省市进行了犬布氏杆菌病血清学流行病学调查。共检测的4750份犬血清中60份为阳性,其中,29份检测到粗糙型布氏杆菌抗体(牧区2份、农区4份、城区23份),31份检测到光滑型布氏杆菌抗体(牧区19份、农区2份、城区10份)。个体阳性率为1.26%(牧区6.69%,农区1.53%,城区0.84%),被调查省市均有犬感染布氏杆菌。 分别对3份犬脾脏和1份犬全血病料进行了布氏杆菌分离鉴定。结果从1份全血中分离到1株布氏杆菌(命名为Xue-1),经传统的鉴定方法鉴定为犬布氏杆菌。 对犬布氏杆菌Xue-1(本实验分离)、RuGao(中国动物卫生与流行病学中心监测室人兽共患病实验室保存)和1124(中国疾病预防控制中心传染病所布病室保存)进行了多种PCR方法的鉴定。3株分离菌株经VirB8-PCR均扩增出大小为716bp的片段,与参考标准菌株B.suis 1330、B.abortus A544、B.canis RM6/66和B.melitensis 16M扩出的片段大小一致。采用Bruce-ladder PCR和Multi-PCR将分离株1124鉴定为犬布氏杆菌,而将分离株Xue-1和RuGao鉴定为猪布氏杆菌。通过犬布氏杆菌缺失序列鉴定实验发现,菌株Xue-1和RuGao扩增出的1674bp的片段与B.suis 1330完全一致;菌株1124扩增出的607bp的片段与B.canis RM6/66完全一致。这说明菌株Xue-1和RuGao在ppdk基因没有缺失,故认为Xue-1和RuGao为非典型布氏杆菌,而菌株1124为典型犬布氏杆菌。通过对3株分离株的omp25基因和Genbank、ICB、EBI等公共数据库的布氏杆菌及遗传相关性较高的其他细菌的omp25基因序列进行多序列比对,构建系统发育树,进行系统进化分析,发现1124与B.RM6/66聚为一枝,而Xue-1和RuGao与其他的非典型犬布氏杆菌聚为一枝。 MLVA鉴定方法结果表明,3株分离株均与犬布氏杆菌最近缘,同时也与猪布氏杆菌4型的进化关系比较近。单核苷酸荧光实时定量PCR准确的将Xue-1和RuGao鉴定为犬布氏杆菌。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S858.292

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【参考文献】
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