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《内蒙古农业大学》 2011年
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转Fat-1基因蒙古绵羊胎儿成纤维细胞系的建立

薛宏艳  
【摘要】:ω-3多不饱和脂肪酸对于维持有机体的正常生长和发育是必不可少的,然而人体中ω-3PUFAs的含量严重不足,ω-6PUFAs的含量却很高。由于ω-6和ω-3脂肪酸在代谢和功能上截然不同,以及它们具有许多相互对立的生理学功能,因而二者的平衡对有机体的自身稳定和正常发育非常重要。本研究从家畜育种角度出发,把控制ω-6多不饱和脂肪酸转化为ω-3多不饱和脂肪酸的基因Fat-1导入绵羊体细胞,利用体细胞克隆技术创造富含ω-3PUFAs的新型绵羊,培育转Fat-1基因高品质肉羊新品种。 实验建立了雄性蒙古绵羊胎儿成纤维细胞系,以秀丽隐杆线虫总RNA为模板合成第一链cDNA,引用设计好的引物扩增cFat-1基因,纯化后连接到pTEK载体构建pTFK-c重组质粒,转化DH-5α感受态细胞后进行重组质粒的提取和测序。然后对核对正确的cFat-1基因进行密码子优化后得到oFat-1,将oFat-1连接到载体pTEK上构建pTEK-o重组质粒,脂质体介导法转染蒙古绵羊胎儿成纤维细胞,经抗生素筛选获得稳定整合Fat-1基因的蒙古绵羊胎儿成纤维细胞。 PCR、RT-PCR鉴定结果证明Fat-1基因已整合进入细胞基因组内。作为阶段性成果,本实验获得的转基因阳性细胞可以作为供体进行体细胞核移植,得到整合Fat-1基因的克隆胚胎,为探索通过转基因手段改善羊肉品质奠定坚实的基础。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S826

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【参考文献】
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