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《内蒙古农业大学》 2011年
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北沙柳种质资源库遗传多样性的SSR分子标记分析

李小龙  
【摘要】：北沙柳是杨柳科柳属多年生灌木,具有很高的生产和饲用等价值,是防风固沙的先锋植物。本研究采用SSR分子标记技术,对国家种质资源保存库内9个不同产地的北沙柳种群进行了遗传多样性分析,旨在为北沙柳种质资源库管理以及优良无性系选育提供科学依据。研究结果如下: 1采用L_(25)(5~5)正交表,获得北沙柳SSR-PCR的适宜反应体系:DNA模板为90ng,引物1.2μmol/L,dNTP浓度为0.5mmol/L,TaqDNA聚合酶1.5U,10×buffer为6.25μM。SSR的PCR扩增条件为:94℃预变性2min,94℃变性40s,54℃退火1min,72℃延伸2min,共30个循环,4℃保存。 2利用从45对SSR引物中筛选出12对多态性高、重复性好的SSR引物,在9个北沙柳种群中,扩增得到73条带,多态性百分率为86.3%,每对引物扩增位点数2～18不等,平均每对引物扩增6.1个位点;引物等位位点多态信息含量为60.27%～72.60%,平均值为66.36%。Shannon′s信息指数变幅在0.2382～0.2934之间,平均为0.2687。 3用遗传相似系数对9个北沙柳种群进行UPMGA聚类分析,在相似系数1.8301处将9个北沙柳种群聚成两大类群。利用POPGENE1.32软件计算种群间的遗传相似系数(GS)变异范围为0.9318～0.9846,表明北沙柳种群间存在一定的遗传变异。 4通过基因型研究北沙柳种群无性系之间的遗传相似系数发现伊金霍洛旗扎萨克镇门克庆嘎查这一种群内无性系的遗传相似系数最大值为89%,明显低于其它种群,具有作为苗木选育来源地的潜能,而乌审旗查汗淖尔和呼拉胡社这两个种群内无性系间遗传相似系数小于64%组合数分别为4和2,表明该种群中的北沙柳无性系具有开展选择育种的潜力。
【关键词】：北沙柳 SSR分子标记 遗传多样性 种质资源库
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：S793.9
【目录】：
  • 摘要3-4
  • Abstract4-8
  • 1 引言8-18
  • 1.1 北沙柳研究现状8-13
  • 1.1.1 北沙柳的生物学特性8-9
  • 1.1.2 北沙柳的人工造林和防风固沙功能9
  • 1.1.3 北沙柳的产业化开发9-10
  • 1.1.4 北沙柳的优良无性系选育10-11
  • 1.1.5 北沙柳的无性系快速培育11
  • 1.1.6 北沙柳的种子天然更新研究现状11-13
  • 1.2 遗传标记的概念及分类13-17
  • 1.2.1 形态学标记13-14
  • 1.2.2 细胞学标记14
  • 1.2.3 生化（蛋白质）标记14
  • 1.2.4 DNA 分子标记14-17
  • 1.3 本研究目的及意义17-18
  • 2 材料与方法18-25
  • 2.1 主要试剂和所需仪器设备18-19
  • 2.1.1 主要试剂18
  • 2.1.2 主要仪器设备18-19
  • 2.2 实验材料19
  • 2.3 实验方法19-24
  • 2.3.1 北沙柳 DNA 的提取19-20
  • 2.3.2 DNA 质量的检测20
  • 2.3.3 SSR–PCR 反应体系的选择20-22
  • 2.3.4 PCR 反应程序22
  • 2.3.5 SSR 引物的筛选22-23
  • 2.3.6 SSR–PCR 扩增产物电泳23-24
  • 2.4 数据分析24-25
  • 2.4.1 数据统计方法24
  • 2.4.2 SSR 遗传多样性分析24-25
  • 3 结果与分析25-31
  • 3.1 SSR 分子标记分析25-26
  • 3.1.1 DNA 纯度的电泳检测25
  • 3.1.2 SSR-PCR 体系的优化25-26
  • 3.1.3 SSR 多态性引物的筛选26
  • 3.2 SSR 多态性分析26-28
  • 3.3 种群内遗传多样性参数28
  • 3.4 种群间遗传分化与基因流28
  • 3.5 种群间遗传距离及遗传关系28-30
  • 3.6 种群内无性系遗传相似系数30-31
  • 4 讨论31-36
  • 4.1 北沙柳种群 SSR 标记初探31-33
  • 4.1.1 北沙柳叶片基因组 DNA 提取过程中应注意的问题31-32
  • 4.1.2 PCR 反应体系及检测32
  • 4.1.3 SSR 标记引物的选择32-33
  • 4.2 北沙柳种群的 SSR 遗传多样性分析33-35
  • 4.2.1 DNA 分子水平的遗传多样性33
  • 4.2.2 北沙柳种群的遗传结构33
  • 4.2.3 北沙柳不同种群遗传多样性研究33-34
  • 4.2.4 北沙柳种群的 SSR 聚类分析34-35
  • 4.3 北沙柳种质资源的保护35
  • 4.4 北沙柳种群的遗传改良35-36
  • 4.5 北沙柳种群内无性系遗传相似系数分析36
  • 5 结论36-38
  • 致谢38-39
  • 参考文献39-45
  • 作者简介45

【参考文献】
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