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《内蒙古农业大学》 2011年
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enJSRV及其受体HYAL2在蒙古绵羊子宫和胚胎中的表达与定位

徐萌杰  
【摘要】:在长期进化过程中整合于脊椎动物基因组中的某些内源性逆转录病毒,在胎盘形成过程扮演重要角色,起到增强遗传基因功能,并保护宿主免受相关外源致病性病毒侵害的作用。绵羊基因组中含有与外源性绵羊肺腺瘤逆转录病毒(exogenous jaagsiekte sheep retrovirus,exJSRV)密切相关的约20拷贝内源性逆转录绵羊肺腺瘤病毒(endogenous jaagsiekte sheep retrovirus,enJSRV)序列,其中exJSRV是绵羊肺腺瘤病(ovine pulmonary adenomatosis,OPA)的致病因子,而透明质酸酶2(hyaluronidase 2,HYAL2)则是enJSRV和exJSRV的共同受体。但enJSRV与其受体HYAL2在绵羊胚胎发育过程中所发挥的确切作用仍不明了。 为了探索妊娠蒙古绵羊子宫和胚胎中是否存在enJSRV和受体HYAL2基因的表达及作用,本试验首先随机抽取妊娠27d、56d、91d和107d蒙古绵羊的子宫内膜、绒毛膜、胎盘和胚胎为研究材料,采用半定量RT-PCR技术进行了初步探究。随后设计特异性引物和Taq Man探针,建立了实时荧光定量RT-PCR技术检测enJSRV及其受体HYAL2 mRNAs的方法,并运用该方法比较系统地对enJSRV及其受体HYAL2 mRNAs在不同妊娠时期(30d、50d、70d、90d、110d和130d)蒙古绵羊子宫内膜、绒毛膜、胎盘和胚胎中的表达情况进行了检测分析。然后分别将enJSRV及其受体HYAL2的RT-PCR产物纯化进行地高辛探针的标记,优化组织原位杂交技术,并应用该方法检测了enJSRV及其受体HYAL2 mRNAs在不同妊娠时期(30d、50d和130d)蒙古绵羊子宫内膜、绒毛膜、胎盘和胚胎组织的空间定位。 研究结果表明: 1.在妊娠27d、56d、91d和107d蒙古绵羊的子宫内膜、绒毛膜、胎盘和胚胎中,均获得了条带单一的enJSRV及其受体HYAL2扩增片段,且该片段与GenBank中的已登录的绵羊enJSRV和HYAL2同源性分别达到95.9%和98.3%。证实enJSRV及其受体HYAL2 mRNAs在蒙古绵羊不同妊娠时期的子宫和胚胎组织中均有表达。因此,本项研究为深入探究enJSRV及其受体HYAL2在蒙古绵羊妊娠期的生殖生物学作用奠定了基础。 2.蒙古绵羊在不同妊娠时期(30d、50d、70d、90d、110d和130d)子宫和胚胎组织中均有enJSRV mRNA表达。通过统计学分析得出:胎盘组织中enJSRV基因的表达于90d时达到高峰,然后开始下降,直至妊娠130d时表达量达到最低;子宫内膜组织中enJSRV mRNA的表达于30d和50d相对较高;绒毛膜组织中enJSRV mRNA的表达于妊娠50d时表达量最低,70d和110d相对较高。序列测定结果显示,enJSRV基因片段与GenBank中的已登录的5种enJSRV序列的同源性为100%。提示enJSRV的表达与妊娠期子宫内的结构变化和功能有关,为进一步研究enJSRV在妊娠蒙古绵羊子宫和胚胎组织细胞中的空间定位及生物学作用奠定了重要基础。 3.蒙古绵羊在在不同妊娠时期(30d、50d、70d、90d、110d和130d)子宫和胚胎组织中均有HYAL2 mRNA表达。通过统计学分析得出:HYAL2 mRNA于蒙古绵羊妊娠30d子宫内膜和胎盘相对较高,于妊娠130d子宫内膜、绒毛膜和胎盘相对较低。序列测定结果显示,HYAL2基因片段与GenBank中的已登录的5种HYAL2序列的同源性为91.9%。而enJSRV与其受体HYAL2 mRNA之间无线性相关性,这可能由于二者的表达调控机制不同所致。 4.应用组织原位杂交技术检测enJSRV及其受体HYAL2 mRNAs在不同妊娠时期(30d、50d和130d)蒙古绵羊子宫内膜、绒毛膜、胎盘和胚胎组织的空间定位,结果显示,enJSRV及其受体HYAL2 mRNAs的阳性信号,出现于腔上皮细胞、腺上皮细胞、血管内皮细胞、肉阜、胎盘绒毛叶及妊娠30d的胚胎组织。该试验结果为目前众多学者公认的多核合胞体形成假说,提供了有力的形态学依据。 本项研究是国内首次对enJSRV及其受体HYAL2的表达特性及空间定位进行的初步探寻,为深入研究enJSRV及其受体HYAL2在滋养层细胞的分化、移行、融合,胎盘形成、胚胎发育及防御外源性病毒菌的侵入等过程中的生殖生物学作用提供了可靠依据,并为进一步揭示胎盘功能开辟了又一有益途径。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S826

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