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《内蒙古农业大学》 2017年
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内蒙古地区乳源金黄色葡萄球菌肠毒素基因分布的调查及Ⅰ型肠毒素蛋白表达

齐欢欢  
【摘要】:试验旨在了解内蒙古地区临床型奶牛乳房炎乳样中金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal enterotoxin,SE)基因的分布状况,为预测SE的污染风险和研制金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,S.aureus)疫苗提供基础资料。采用PCR检测方法,对从内蒙古地区奶牛乳房炎乳样中分离到的121株S.aureus.进行sea~selq 16种肠毒素基因检测。结果表明,121株S.aureus全部携带SE基因,其中携带比例较高的是sei、selm和selj基因,分别为121株(100%)、81株(66.94%)和64株(52.89%);未检测到see、seh、selo和selp基因;携带新型肠毒素基因(seg~selq)共有121株(100%),其比例高于携带传统肠毒素基因(sea~see)的59株(48.76%)。同时携带2种及2种以上SE毒基因的有118株(97.52%),组合也很复杂,表明内蒙古地区由金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳房炎情况复杂,防治较为困难。在内蒙古地区临床型奶牛乳房炎乳样中分离的S.aureus均含有I型肠毒素基因,因此对I型肠毒素(SEI)的进一步研究十分有必要。为了研究金黄色葡萄球菌I型肠毒素的抗体制备和金黄色葡萄球菌的疫苗制备,本试验对SEI的蛋白表达进行研究。试验根据GenBank中sei的基因序列(登录号:AB060537.1),设计一对含有酶切位点的特异性引物,采用PCR技术从金黄色葡萄球菌中扩增出sei,亚克隆入Trans1-T1.载体中,构建重组质粒pET32a-sei,以IPTG诱导表达,镍柱纯化重组蛋白,用His标签单克隆抗体和金黄色葡萄球菌I型肠.毒素单克隆抗体进行免疫印迹分析验证重组蛋白的表达。结果显示:PCR成功扩增出sei基因,片段大小为634 bp;经SDS-PAGE鉴定成功表达了分子质量约为45KDa的重组蛋白;纯化得到了单一的目的条带,重组蛋白纯度较高;Western blot检测表明重组蛋白具有良好的反应原性。试验表明表达系统Trans1-T1/BL21能成功表达SEI蛋白。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.611

【参考文献】
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