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《内蒙古农业大学》 2017年
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产气荚膜梭菌的分离鉴定及PCR检测方法的建立

雷宇  
【摘要】:产气荚膜梭菌是引起多种人畜共患病的条件致病菌,为了解内蒙古地区牛、羊产气荚膜梭菌的型的分布情况,根据GenBank上发表的产气荚膜梭菌16S rRNA基因和编码α、β、ε毒素的基因设计了 4对引物,建立建立产气荚膜梭菌16SrRNA的PCR检测方法和产气荚膜梭菌α、β、ε毒素的多重PCR分型方法,并对采集的64份病料进行分离、培养和生化鉴定,然后用上述建立的PCR方法对分离菌进行检测与分型。构建产气荚膜梭菌16S rRNA基因的重组质粒,分析其与产气荚膜梭菌参考菌株的同源性并构建进化树。试验结果表明:建立的产气荚膜梭菌16S rRNA PCR方法和产气荚膜梭菌α、β、ε毒素的多重PCR分型方法均能扩增出相应的条带,并且敏感性和特异性均比较高。对采集的64份病料中的细菌进行分离、培养,并经革兰氏染色镜检,生化鉴定后,有11株分离菌与国内外报道的产气荚膜梭菌的形态及生化特性一致。用上述两种PCR方法对这11份分离菌进行检测,扩增出的条带大小与预期的一致,其中多重PCR结果显示,这11株分离菌中有3株A型产气荚膜梭菌,3株C型产气荚膜梭菌,5株D型产气荚膜梭菌。测序结果表明这11株产气荚膜梭菌的16S rRNA和参考菌株的16S rRNA的同源性在98%以上。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.61

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