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《内蒙古农业大学》 2002年
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抗新疆出血热病毒核蛋白单克隆抗体的制备及诊断应用

韩磊  
【摘要】: 利用经纯化的新疆出血热(XHF)病毒基因工程抗原XHF-NP免疫BALB/C鼠,经免疫效果检测后收集免疫鼠脾细胞,然后用化学助融剂聚乙二醇(PEG)将其与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经过阳性克隆筛选和单细胞克隆化培养,得到10株抗新疆出血热病毒核蛋白单克隆抗体(McAb)。然后利用鼠单抗纯化试剂盒(HiTrap affinity columns)纯化上述单抗获得高纯度的单克隆抗体,再对纯化过的上述单抗作免疫球蛋白型和亚型的鉴定、特异性的鉴定和滴度的测定。经检测,10株上述单抗中,4株属于IgG1型,6株属于IgM型单抗;IgG型单抗可全部用于捕捉XHF病毒抗原,IgM型单抗不能全部用于捕捉XHF病毒抗原。通过实验发现:用收集小鼠腹水的途径可获得大量单抗。 鉴于2001年新疆巴楚县XHF的严重疫情,我们利用已建立的实验室诊断方法对疫区内病人血清、正常人血清和羊群血清进行了XHF特异性IgG抗体、IgM抗体、XHF病毒抗原以及XHF病毒核酸的检测。结果发现该疫区农牧民中XHF抗体(IgG、IgM)水平较高,并且在正常人群和羊群中普遍存在着XHF的隐性感染;利用自制的抗XHF-NP单抗建立的抗原捕获ELISA方法可以捕捉到急性期病人血液中的XHF病毒抗原。通过检索Genebank中XHFV核蛋白基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR方法从急性期病人血液中检测到了XHFV核酸。通过比较发现上述几种方法用于血清流行病学调查,其结果具有高度一致性,进而说明上述方法具有较好的实用性,为下一步在更大范围内开展XHF流行病学调查做了方法上的有益探索。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S852.4

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【参考文献】
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