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《内蒙古农业大学》 2002年
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实验性禽脑脊髓炎分子发病学及分子免疫机理的研究

王纯洁  
【摘要】: 禽脑脊髓炎(Avian Encephalomyelitis, AE)是由细小RNA病毒科(Picornaviridae)、肠病毒属(Enterovirus)的禽脑脊髓病毒(AE virus, AEV)引起的,以主侵幼鸡中枢神经系统引起非化脓性脑炎为主要病理特征的一种病毒性传染病。本病是Jones氏1930年首次发现的,1939年美国兽医学会鸡病命名委员会正式命名为禽脑脊髓炎。本病呈世界性分布,对养鸡业特别是种鸡饲养业造成了极大危害。1980年以后随着优良种鸡、种蛋的引入本病传入我国。全世界和我国的科学工作者对本病进行了广泛的研究,内蒙古农业大学兽医病理学科自1991年,连续3次获得国家自然科学基金委员会的资助,分离并建立了AEV-NH937株,系统描述了自然病例和人工感染的成年鸡、雏鸡、鸡胚的病理变化,人工感染后AEV在鸡体内的动态分布,并制备出琼扩抗原和灭活油乳剂疫苗用于临床检测和预防,取得了重要研究成果。本项实验研究,旨在过去工作的基础上,利用分子生物学、分子免疫学的技术手段,探讨和揭示AE发生发展过程中的某些分子发病学机理的问题,并试图建立一种具有普遍指导意义的动物分子病理学研究的工作模型。本研究用AEV-NH937株组织毒1:100倍稀释,0.03ml/只脑内接种1日龄SPF雏鸡,分别在攻毒后1、3、5、10、14、20、25和30天迫杀实验攻毒组4只,对照观察组2只,分离血清,制备外周血、胸腺、法氏囊和脾脏的淋巴细胞悬液,同时采集脑组织,10%福尔马林固定,制备石蜡切片,做H.E.染色、免疫组化染色、原位杂交及神经凋亡的末端标记法染色。在研究过程中,采用了病毒接种技术、普通病理学研究方法、流式细胞仪技术、RT-PCR技术、原位杂交技术、免疫组化技术、凋亡细胞末端标记技术,系统研究了不同日龄的SPF雏鸡人工感染AEV-NH937株后的病理变化,T和B淋巴细胞、T淋巴细胞亚群的动态变化规律,淋巴细胞表面某些粘附分子的变化,淋巴细胞和神经元的坏死与凋亡,雏鸡脑组织中产生趋化因子MIP-1β和IL-8细胞的变化规律,脑组织中围官性细胞浸润的细胞类型。本研究取得的主要成果是:(1)血液、法氏囊、脾脏的CD19+细胞(B细胞)平均百分数,在攻毒后3、5天时均显著(P0.05)或不显著高于对照,待其转化为浆细胞后,CD19+细胞数量下降。结合血清IgM、IgG测定结果,显示在抗AEV-NH937株感染的初期体液免疫发挥WP=3重要作用。(2)血液、法氏囊、胸腺、脾脏的淋巴细胞粘附分子CD18+(LFA-1家族的β链,β2整合素),CD31+(PECAM-1)阳性细胞平均百分比在攻毒后3~10天,与对照组相比差异显著(P0.05)或不显著。证明非化脓性炎灶中淋巴细胞浸润源于淋巴细胞表面粘附分子的高表达。(3)本研究在国内首次对鸡IL-8(白细胞介素-8)和MIP-1β(巨噬细胞炎性蛋白-1β)两种趋化因子进行克隆和序列测定,其核苷酸组成的同源性与文献相比较分别为100%和98%,制备地高辛(Digoxin)标记的IL-8和MIP-1β探针做原位杂交检测,显示AEV-NH937感染鸡脑内IL-8和MIP-1β产生细胞比正常对照组增多,证明非化脓性脑炎发展中淋巴细胞渗出与游向炎灶与脑内IL-8和MIP-1β等趋化因子浓度升高密切相联。(4)用FITC(异硫氰酸荧光素)和R-PE(藻红蛋白)标记的抗CD3、CD4、CD8单抗进行脑组织切片的免疫组化染色,显示脑血管周围渗出的淋巴细胞以CD3+CD8+T淋巴细胞为主。由数层淋巴细胞形成管套的也是这样。CD3+CD8+T细胞是细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。证明AE发展到一定阶段时细胞免疫发挥主导作用。(5)用流式细胞仪检测淋巴细胞膜上的磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine),用末端标记技术检测发生凋亡的神经元,本研究首次显示在AEV-NH937株作用下可以引起淋巴细胞和神经细胞发生凋亡。(6)本研究中攻毒实验组SPF雏鸡发生了典型的非化脓性脑炎,包括脑实质的病变与免疫系统的防御性反应两个方面。其中神经元既有变性、坏死、卫星现象和小胶质细胞的噬神经元现象,也存在AEV-NH937株感染的神经元在CTL介导下发生凋亡的现象。(7) 本研究首次报道了SPF雏鸡一月龄内血液、胸腺、脾脏的CD3、CD4、CD8阳性T淋巴细胞的变化规律。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S856

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【引证文献】
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【二级参考文献】
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