收藏本站
《内蒙古农业大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

口蹄疫病毒2C3ABC基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

郑立运  
【摘要】: 本试验旨在利用毕赤酵母表达系统,对FMDV非结构蛋白2C3ABC基因在体外进行大量表达,从而建立一种口蹄疫的分子鉴别诊断方法。首先,用P2和3ABC阳性克隆通过连接PCR方法获得目的基因并将其克隆到pGEM-T Easy载体上,并转化E.Coli DH5a感受态细胞中,经PCR、酶切以及测序证明得到了完整的2C3ABC基因,并与国内外参考序列进行比较分析。然后,将目的基因亚克隆于pPICZaA表达载体并转化大肠杆菌DH5a,以Zeocin~(TM)抗性筛选阳性克隆,大量提取重组表达质粒并用PmeⅠ酶线性化后电转化入毕赤酵母SMD1168感受态细胞,通过Zeocin~(TM)抗生素梯度浓度筛选,获得重组酵母用0.5%甲醇诱导表达,通过SDS-PAGE电泳、Western blotting分析,结果表明,2C3ABC基因在毕赤酵母中成功表达,其表达产物为一95ku的融合蛋白,并能被口蹄疫病毒阳性血清识别。经薄层扫描分析,表达量占总蛋白量的15%以上。该项研究为应用FMD非结构蛋白基因表达声物为抗原建立鉴别诊断方法提供了材料。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S852.65

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 任武泽,潘洁,孙世铎,庄娟,饶忠,徐泉兴,尤永进;口蹄疫非结构蛋白3ABC的融合表达及纯化研究[J];上海畜牧兽医通讯;2004年03期
2 孙涛,陆苹,王欣;一种实用的筛选病毒抗原表位方法的建立(英文)[J];生物化学与生物物理进展;2004年03期
3 马江涛;卢曾军;曹轶梅;郭慧琛;郭建宏;祝秀梅;刘在新;杨孝朴;;口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因重组杆状病毒的构建与表达[J];甘肃农业大学学报;2007年04期
4 罗宝正,薄清如,陈金顶,王伟毅,程钢,何蕴韶;昆虫杆状病毒系统表达口蹄疫病毒3ABC基因[J];中国病毒学;2005年03期
5 李娟;刘磊;冯力;;猪捷申病毒中国株3ABC基因的克隆及序列分析[J];甘肃农业大学学报;2007年02期
6 马江涛;卢曾军;曹轶梅;郭慧琛;郭建宏;祝秀梅;杨孝朴;刘在新;;口蹄疫病毒NSP 3ABC基因在昆虫细胞中的分泌表达及其活性检测[J];生物工程学报;2007年03期
7 索青利;赵明秋;琚春梅;陈金顶;王伟利;陈立军;;口蹄疫病毒VP1与3ABC基因片段的克隆及表达[J];华南农业大学学报;2008年01期
8 曲哲会;王君伟;;口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的原核表达及其产物的活性检测[J];中国兽医科学;2006年09期
9 尤永进,朱彩珠,葛艳,陈波,张强,饶忠,徐泉兴,卢永干;口蹄疫病毒非结构蛋白3abc基因的克隆与表达[J];中国病毒学;2003年02期
10 井申荣;甲型肝炎病毒的分子生物学研究进展[J];国外医学.流行病学.传染病学分册;2000年05期
中国重要会议论文全文数据库 前8条
1 詹爱军;覃健萍;刘忆云;马静云;曹永长;毕英佐;;口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的基因克隆与序列测定[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
2 郑敏;金宁一;鲁会军;夏志平;马鸣潇;葛淑敏;;口蹄疫病毒3ABC基因截短体在毕赤酵母中的表达及鉴定[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
3 郑敏;金宁一;鲁会军;李昌;马鸣潇;;口蹄疫病毒3ABC基因截短体在毕赤酵母中表达及鉴定[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(下)[C];2005年
4 沈小燕;丛国正;常惠芸;邵军军;独军政;林彤;谢庆阁;;持续感染口蹄疫病毒VP1和3ABC基因变异研究[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集(下册)[C];2006年
5 鲁会军;韩松;金宁一;;口蹄疫诊断方法研究进展[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
6 张喜悦;徐天刚;刘春菊;赵永刚;赵云玲;王志亮;;免疫层析试纸条(ICS)检测口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体的研究[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
7 鲁会军;韩松;郑敏;贾雷立;王凯;金宁一;;口蹄疫病毒3AB基因在重组杆状病毒中的表达及检测[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
8 马鸣潇;金宁一;霍晓伟;金明兰;沈国顺;;口蹄疫病毒三价核酸疫苗分子设计与免疫原性研究[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前7条
1 郑立运;口蹄疫病毒2C3ABC基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达[D];内蒙古农业大学;2003年
2 曹轶梅;口蹄疫病毒非结构蛋白基因3ABC的克隆及3AB基因在大肠杆菌中的表达[D];甘肃农业大学;2002年
3 任武泽;FMD鉴别诊断抗原3ABC的原核表达与纯化及RNAi抑制FMDV复制的初步研究[D];西北农林科技大学;2004年
4 马江涛;口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因在昆虫细胞中的表达与活性检测[D];甘肃农业大学;2007年
5 郑敏;口蹄疫病毒多基因的克隆、表达及基因工程疫苗实验免疫研究[D];吉林大学;2005年
6 马金玲;牦牛口蹄疫病毒持续感染分离株主要功能蛋白基因的变异研究[D];甘肃农业大学;2003年
7 曲哲会;口蹄疫病毒RT-PCR与抗体ELISA检测方法的建立及初步应用[D];东北农业大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026