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《内蒙古农业大学》 2003年
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里氏木霉RUT—C30 β—甘露聚糖酶的诱导表达及其cDNA的克隆

高宏斌  
【摘要】: 在里氏木霉Rut C-30的基础培养基(Mandels营养液)中加入固定碳源乳糖和槐豆胶,然后将可变碳源(云杉纤维、玉米芯纤维、麦杆纤维、麦杆木聚糖、玉米芯木聚糖、云杉甘露聚糖)进行单因子、双因子、三因子、四因子、五因子的里氏木霉Rut C-30正交培养实验,并以槐豆胶为底物用3,5二硝基水杨酸法测定培养液中β—甘露聚糖酶的活力。从而确定了酶活最高且菌体生长良好的含云杉纤维、麦杆木聚糖和云杉甘露聚糖的诱导培养基为最佳培养基,用该培养基培养的里氏木霉(T.reesei)Rut C-30使其转录的β-甘露聚糖酶(β-1,4-mannan mannohydrolase EC 3.2.1.78)mRNa量能够满足RT-PCR的要求。 分取诱导培养液中的菌体,用异硫氰酸胍法提取总RNA,总RNA再经无RNA酶的DNA酶处理后用于RT—PCR。在PCR扩增目的基因时,通过优选扩增体系,使镁离子浓度为1.25mM时RT—PCR可顺利地获得目的基因,并能定向克隆到载体pGEM—3Z(amp~r)中。 用克隆载体转化宿主大肠杆菌JM109,通过筛选获取阳性克隆子,对阳性克隆子进行酶切与PCR鉴定,并对载体中插入的目的基因进行测序。其测序结果与genbank中的里氏木霉Rut C-30β-甘露聚糖酶成熟肽cDNA序列进行序列同源性比较,结果二者序列完全一致。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:Q933

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 李雅楠;芽孢杆菌β-甘露聚糖酶新基因的快速筛选、克隆及表达研究[D];中国农业科学院;2006年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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7 张辉;;1株青霉固体发酵产酸性β-甘露聚糖酶条件优化[J];安徽农业科学;2008年05期
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10 李琼芳;刘明学;徐志鹏;康晋梅;苟清碧;;纤维素分解菌的分离及产酶条件研究[J];安徽农业科学;2008年18期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张小玉;朱小六;张宇林;徐保国;;基于CAN总线的β-甘露聚糖酶发酵控制系统的研究[A];第二十七届中国控制会议论文集[C];2008年
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8 周响艳;职爱民;付畅国;王志敏;郭瑞庭;;β-甘露聚糖酶在玉米—豆粕型生长猪日粮中的应用研究[A];饲料酶制剂的研究与应用[C];2009年
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10 张峻;何志敏;;地衣芽孢杆菌中性β-甘露聚糖酶的分离纯化[A];第三届全国传质与分离工程学术会议论文集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
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2 王秀娟;嗜热真菌纤维二糖水解酶(CBHⅠ、CBHⅡ)和内切葡聚糖酶(EGⅠ)的分子改造[D];山东农业大学;2011年
3 张强;玉米秸秆发酵生产酒精的研究[D];吉林大学;2011年
4 潘志东;矿渣水泥和魔芋葡甘聚糖的振动机械力化学效应[D];华南理工大学;2011年
5 赵萌;菊糖果糖转移酶的研究[D];江南大学;2011年
6 徐杰;水稻秸秆降解放线菌的分离鉴定及其降解机理研究[D];哈尔滨工业大学;2011年
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8 石波;玉米芯酶法制备低聚木糖的研究[D];中国农业大学;2001年
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10 杨汉博;地衣芽胞杆菌BL15和BL19对黄鸡的营养、微生态效应研究[D];四川农业大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郭春艳;海洋细菌Bacillus velezensis DM09在油菜中的定植及对油菜菌核病的防治研究[D];华中农业大学;2010年
2 李兆防;拮抗毛壳和木霉混用防治土传病害的初步研究[D];山东农业大学;2009年
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4 庄童琳;利用苹果渣固态发酵提高黑曲霉产β-甘露聚糖酶活性的研究[D];甘肃农业大学;2010年
5 居靓;普鲁兰类酵母G7b菌株β-甘露聚糖酶的研究[D];中国海洋大学;2010年
6 陈思力;魔芋葡甘聚糖/丙烯酰胺改性膜的研究及其在芦柑保鲜中的应用[D];福建农林大学;2010年
7 宋东蓥;木聚糖酶基因工程菌G81的构建及酶学性质研究[D];河南师范大学;2010年
8 陈晓青;β-甘露聚糖酶产生菌培养条件优化及酶液性质研究[D];华东理工大学;2011年
9 刘海波;高产纤维素酶菌的筛选鉴定及其液体发酵条件的研究[D];中南林业科技大学;2008年
10 毛绍名;枯草杆菌β-甘露聚糖酶基因的克隆及表达[D];中南林业科技大学;2006年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陶乐平;南欧紫荆(Cercis Siliquastrum L)种子中甘露聚糖酶的分离、纯化及其动力学性质[J];安徽大学学报(自然科学版);1995年03期
2 杜先锋,李平;四川白魔芋球茎中甘露聚糖酶部分酶学性质[J];合肥工业大学学报(自然科学版);2000年05期
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10 李剑芳,王斌林,邬敏辰;黑曲霉酸性β-甘露聚糖酶的发酵工艺[J];食品与发酵工业;2002年09期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 柴萍萍;枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WY45产β-甘露聚糖酶的纯化与性质研究[D];中国农业大学;2005年
【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 高海有;β-甘露聚糖酶和木聚糖酶基因共表达体系构建[D];中国农业科学院;2012年
2 王亚伟;Penicillium freii F63来源的甘露聚糖酶的基因克隆、表达与酶学性质研究[D];中南民族大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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3 刘自镕,任建平,冯瑞良,肖朝峰,王侠,金宗武,周桂芳,殷立德,孙中爱,孙培敏;大麻酶法脱胶研究[J];纺织学报;1999年05期
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1 刘超纲,勇强,余世袁;里氏木霉诱导合成木聚糖酶的调控[J];南京林业大学学报;1999年03期
2 邵金华;孟凡玲;蒋琼凤;冮洁;;里氏木霉重组t-PA的酶性质的研究[J];氨基酸和生物资源;2009年03期
3 冮洁,杜连祥,路福平,廖海印;里氏木霉306产t-PA固态发酵条件的研究[J];工业微生物;2005年02期
4 李红;;内切纤维素酶EGII基因克隆及其在毕赤酵母中高密度发酵表达[J];中山大学学报论丛;2007年11期
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7 洪枫,陈牧,勇强,杜琼华,余世袁;里氏木霉制备木聚糖酶的产酶历程[J];南京林业大学学报;1998年01期
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9 李刚;李雪;袁虎;江春梅;宋昊;刘华;黎勇;;里氏木霉ACCC30449纤维素酶特性的初步研究[J];内江师范学院学报;2006年S1期
10 陈柏铨,彭万峰,付国英,赖娇英,余惠生;纤维素直接发酵乙醇微生物的选育──Ⅲ.里氏木霉与运动发酵单胞原生质体融合的研究[J];纤维素科学与技术;1994年02期
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3 邹根;石少华;江艳萍;陈玲;张珺;王成树;周志华;;热酸菌(Acidothermus cellulolytics)内切酶E1在里氏木霉(Trichoderma reesei)内的异源表达效率的研究[A];中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
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5 邢苗;刘刚;汤新;张煜;;里氏木霉纤维素酶系列基因在毕赤酵母中的高效表达[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年
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3 张中桥;COX-2和VEGF协同促进胃癌生长[N];中国医药报;2005年
4 吴一福;华中科大构建成功脑啡肽星形胶质细胞株[N];中国医药报;2006年
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8 本报记者 操秀英;新型基因工程菌:“吃”完农药就“自杀”[N];科技日报;2009年
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2 杭志喜;溶解氧对里氏木霉产纤维素酶的作用与控制[D];南京林业大学;2008年
3 张秋卓;稻草秸秆降解中生物表面活性剂的增效作用及发酵新工艺[D];哈尔滨工业大学;2008年
4 冮洁;基因工程菌株里氏木霉合成t-PA发酵条件及r-PA基因在甲醇毕赤酵母中表达的研究[D];天津科技大学;2005年
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6 周海燕;甘露聚糖酶Man23的基因表达体系优化及其分子改造[D];湖南农业大学;2008年
7 张运雄;欧文氏杆菌CXJZ95-198非纤维素降解特性及manA基因的克隆研究[D];中国农业科学院;2006年
8 王溪森;草本纤维生物提取关键酶基因克隆与表达研究[D];中国农业科学院;2009年
9 王宁娟;饲用酶制剂生物学价值评价技术研究[D];中国农业科学院;2009年
10 王君;表面活性剂辅助蛋白质复性过程机理研究[D];清华大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 高宏斌;里氏木霉RUT—C30 β—甘露聚糖酶的诱导表达及其cDNA的克隆[D];内蒙古农业大学;2003年
2 吕丹丹;里氏木霉中表达质粒的构建及中性纤维素酶基因的表达[D];华东理工大学;2012年
3 闫作梅;用于大豆膳食纤维改性的里氏木霉工程菌的构建[D];东北农业大学;2010年
4 胡一飞;里氏木霉纤维素酶基因的克隆及在水稻中的过表达研究[D];安徽农业大学;2010年
5 陈小兵;里氏木霉RUT-C30甘露聚糖酶基因man1在毕赤酵母中的高效表达[D];中国农业科学院;2006年
6 覃玲灵;里氏木霉的紫外诱变和高活性纤维素酶突变株的选育[D];中南林业科技大学;2011年
7 陈贤东;利用麸皮生物发酵制备低聚糖的研究[D];合肥工业大学;2010年
8 文静;里氏木霉RutC-30β-甘露聚糖酶基因在大肠杆菌中的外分泌型表达[D];内蒙古农业大学;2004年
9 王美花;里氏木霉swollenin在米曲霉中的表达和纯化[D];浙江理工大学;2010年
10 汤文浩;解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens T27甘露聚糖酶的发酵及酶学性质研究[D];华中农业大学;2011年
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