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《内蒙古农业大学》 2005年
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哺乳动物性别鉴定方法的比较研究

乌达巴拉  
【摘要】:本文比较研究了用聚合酶链式反应技术扩增哺乳动物 SRY 特异序列鉴别哺乳动物性别的方法与用免疫学方法中的细胞毒性实验鉴定哺乳动物早期胚胎性别的方法。牛 SRY 引物对公牛的 SRY 特异的 141bp 序列进行扩增。小鼠 SRY 引物对雄鼠的 SRY特异的 266bp 序列进行扩增。从公、母牛和雌、雄小鼠的血液中提取基因组 DNA,用作 PCR 扩增基因组 DNA 的模板。确定最适 PCR 扩增牛和小鼠基因组 DNA 条件,反应在Eppendorf 5301 型 PCR 仪上进行。采用 PCR 扩增牛基因组 DNA 最适条件扩增了 20 头(♀5,♂15)草原红牛的基因组 DNA,14 个雄性样品中均出现清晰可见的特异 DNA扩增带,一个雄性样品未出现特异 DNA 扩增带,而雌性样品无扩增片段出现。同时采用 PCR 扩增小鼠基因组 DNA 最适条件扩增了 20 只(♀7,♂13)昆明白系小鼠的基因组 DNA,11 个雄性样品中均出现清晰可见的特异 DNA 扩增带,两个雄性样品没有出现特异 DNA 扩增带,而雌性样品无扩增片段出现。 用免疫学方法制备 H-Y 抗血清,对 6-8 周龄的昆明白系小鼠进行超数排卵处理,收集 8-细胞到胚泡期的胚胎。将在收集的胚胎中选择形态完好、发育正常的胚胎,将其放入含有 H-Y 抗血清的微滴的培养皿中,用石蜡覆盖,在二氧化碳孵育箱内培养24h。培养后在倒置显微镜下检查经 H-Y 抗血清培养的胚胎,胚胎中几个或全部卵裂球发生溶解,表明有 H-Y 抗原存在即为雄性胚胎,胚胎完好无损或发育至 16-细胞期或囊胚期的为 H-Y 阴性即雌性胚胎。本实验中应用此方法对 13 枚昆明白系小鼠胚胎进行性别鉴定。其中 5 枚胚胎经培养后胚胎中几个或全部卵裂球发生溶解,因此鉴定为雄性胚胎,5 枚胚胎经培养后有的胚胎完好无损,有的发育至囊胚,即鉴定为雌性胚胎,其余 3 枚胚胎没有被鉴定出性别。 结果表明,PCR 法和 H-Y 抗原法均可用来鉴别哺乳动物以及其胚胎的性别。用 H-Y抗原法进行性别鉴定用时比较长、准确率低等不足之处。而用 PCR 法鉴定性别具有相对简单、快速、准确率高等优点,可确立为在实际应用中广泛推广。其创新点为确立可以在实际应用中被推广的方法。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S814.7

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【引证文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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【二级引证文献】
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