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《内蒙古农业大学》 2005年
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利用基因枪轰击法将NHX1、CBF耐逆相关基因导入高羊茅(Festuca arundinacea Schreb.)

梁蕊芳  
【摘要】:高羊茅(Festuca arundinacea Schreb.)是一种优质的草坪草,利用基因工程进行遗传改良的研究一直备受人们关注。我们在建立并研究了高效的高羊茅组培再生体系的基础之上,通过基因枪法转化来自拟南芥的 AtNHX1、CBF3 和 CBF4 基因,获得转基因株系,以期为生物技术培育抗旱、抗寒、耐盐草坪型高羊茅奠定基础。 主要研究结果如下: 1.对高羊茅再生体系的研究与建立。利用幼苗下胚轴建立了高羊茅植株再生体系,当高羊茅种子以次氯酸钠为主要消毒剂时,其最适的浓度和时间分别为次氯酸钠50%(V/V)处理 20 min,种子发芽率为 80%,污染率为 0%。同时发现用高羊茅下胚轴诱导愈伤组织时,下胚轴的不同的切法对愈伤组织诱导有影响,从一端切的诱导愈伤率为 74.7%,比从两端切(55.8%)高出 18.9%。以下胚轴为外植体,2,4-D 的浓度为 9 mg·L-1时,愈伤组织诱导率最高,高羊茅愈伤组织的分化再生率可达 80.7%。 2. 利用基因枪法转化来自拟南芥的 AtNHX1 基因,PCR 检测再生植株 80 株,其中29 株为阳性。随机抽取 PCR 检测阳性植株 Western-blotting 检测也为阳性。同时,对转基因植株进行了草丁膦涂抹实验发现,转基因植株对除草剂的耐性也提高。 3. 拟南芥 CBF4 基因为干旱专一诱导的转录因子 CBF 家族成员,用诱导型启动子RD29A 驱动,含有草丁膦抗性选择标记的 pGreen0229-RD29A-CBF4-DHA 植物表达载体,利用基因枪法轰击高羊茅的胚性愈伤组织,得到 24 株 PCR 检测为阳性的转基因植株。 4. 分别用诱导型启动子 RD29A 和组成型启动子 CaMV35S 驱动,将 CBF3 基因插入到质粒载体 pGreen0229 中,得到含有草丁膦抗性选择标记的植物表达载体pGreen0229-35S-CBF3-DHA 和 pGreen0229-RD29A-CBF3-DHA。利用基因枪法转化高羊茅的胚性愈伤组织,分别都得到 22 株转基因植株,经 PCR 和 Western-blotting 检测表明,CBF3 基因已经整合到高羊茅基因组中。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S688.4

【引证文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 张志飞;抗旱高羊茅品种FapDREB2基因克隆和WAX2基因的遗传转化[D];湖南农业大学;2007年
2 张吉宇;无芒隐子草(Cleistogenes songorica)种质抗旱评价、cDNA文库构建及相关基因克隆与鉴定[D];兰州大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 杨丽丽;根癌农杆菌介导的抗寒基因转录因子CBF转化苹果的研究[D];河北农业大学;2006年
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【参考文献】
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【共引文献】
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7 朱莹;分析耐盐基因与启动子功能的CRE/loxP重组激活系统的构建与检验[D];哈尔滨师范大学;2010年
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【同被引文献】
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1 何阳鹏,于海涛;不同种胚及激素处理对高羊茅愈伤组织诱导的影响[J];安徽农业科学;2003年03期
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7 龙丹凤;农杆菌及基因枪法介导的BAR基因在高羊茅中的遗传转化效率研究[D];甘肃农业大学;2008年
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9 林美娟;胡萝卜抗冻蛋白基因的克隆、原核表达及其遗传转化甘蔗初步研究[D];福建农林大学;2007年
10 王莹;结缕草胁迫诱导型启动子Rd29A的克隆及其功能鉴定[D];北京林业大学;2008年
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